H-HSP70冲激的小鼠骨髓树突状细胞的生物学活性变化及分析

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目的:该实验利用H<,TA>-HSP70<,BCG>复合瘤苗体外冲激(Pulse)小鼠骨髓DC,观察DC的抗原捕获能力、抗原提呈功能等变化.分析探讨H<,TA>-HSP70<,BCG>体外冲激对DC生物学活性的影响及可能机制.方法:无菌取小鼠胫骨和股骨,用PBS冲洗髓腔,用含有GM-CSF和IL-4(10ng/ml)的RPMI-1640培养基培养,诱导DC生成,第六天收集不贴壁细胞.然后用H<,TA>、HSP70<,BCG>、H<,TA>-HSP70<,BCG>分别刺激2天,收集DC及其培养上清,分别用ELISA法和一氧化氮(NO)硝酸还原酶法测上清中IL-12和NO的浓度.用流式细胞仪测内吞FITC标记的dextran的DC的百分率.用MTT法检测不同冲激的DC刺激脾脏不粘附细胞的增殖指数、DC对HCa-F增殖的抑制率及活化的脾脏不粘附细胞对HCa-F的杀伤活性.结论:该实验结果表明H<,TA>-HSP70<,BCG>及单独H<,TA>、HSP70<,BCG>均能促进小鼠骨髓DC的成熟,并且冲激后的DC可以刺激脾不粘附细胞的活化与增殖,活化后的脾不粘附细胞可以杀伤HCa-F细胞.刺激成熟的DC培养上清中IL-12和NO浓度明显高于对照组DC的培养上清,二者可以抑制HCa-F的增殖,NO具有细胞毒活性,可以杀伤HCa-F细胞,因此H<,TA>-HSP70<,BCG>冲激的DC有可能成为有效的肿瘤疫苗.
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