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本研究根据已发表的绵羊种布鲁氏菌国际标准菌株（63/290）omp31基因的序列,设计特异性引物,以新疆绵羊种布鲁氏菌（80/019）菌株的基因组为模板,利用聚合酶链式反应（PCR）技术,扩增出目的基因,并将其连接于克隆载体（PBS-T）质粒中,得到重组质粒PBS-T-omp31,通过PCR及质粒酶切鉴定,证明重组质粒中含有omp31基因。通过对omp31基因的测序表明,omp31基因含有723个bp,与国际标准菌株绵羊种（63/290）的omp31基因有9个bp不同,二者核苷酸序列同源性达98.76%;该基因与国际标准菌株羊种、犬种omp31基因核苷酸序列同源性达99.86%,与国际标准菌株猪种、沙林鼠中、海洋种相应基因核苷酸序列完全相同。用Nhe Ⅰ和BamH Ⅰ同时双酶切重组质粒PBS-T-omp31和原核表达载体质粒PET-28a、真核表达载体质粒pcDNA3.1（+）,通过T4DNA连接酶将目的基因分别连接入表达载体中,得到重组质粒PET-28a-omp31、pcDNA3.1-omp31。经PCR、质粒酶切鉴定插入的omp31基因,测序鉴定具有正确的读码框。然后利用热击法将重组质粒PET-28a-omp31转化入大肠杆菌BL21（DE3）中,经过IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot检测受体菌全菌裂解物,证实omp31得到了表达。以所构建的pcDNA3.1-omp31质粒,肌注免疫家兔,通过虎红平板凝集试验和试管凝集试验,检测免疫家兔的抗布鲁氏菌的抗体,结果表明,在首次免疫11天后通过试管凝集反应测得免疫家兔的抗体效价为1∶100。本试验为进一步研究绵羊种布鲁氏菌外膜蛋白的免疫原性,开发核酸疫苗奠定了基础。