清肝祛湿颗粒对SHR肾素-血管紧张素-醛固酮及主动脉壁profilin-1、cofilin-1蛋白表达调控的研究

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目的:对服用中药经验方清肝祛湿颗粒的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)进行血压监测,以明确其降压效果。运用酶联免疫吸附实验法(ELISA)测定大鼠血清醛固酮(ALD)、肾素(PRA)、血管紧张素Ⅰ (AngⅠ血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)水平,探讨清肝祛湿颗粒治疗高血压的降压机制:通过抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Renin-angiotensin-aldosterone, RAAS)控制血压的可能机制,为临床应用清肝祛湿颗粒治疗高血压提供实验依据。并通过检测大鼠胸主动脉骨架蛋白前纤维蛋白1 (profilin-1)和切丝蛋白1(cofilin-1)明确血管重构(vascular remodeling, VR)在高血压疾病中的发生发展,及清肝祛湿颗粒的治疗对其产生的影响。方法:选取13周龄的SHR 50只,雌雄各半;13周龄正常大鼠(Wistar Kyoto rat, WKY)10只,雌雄各半,均购自北京维通利华试验动物技术有限公司,由广安门医院Ⅱ级动物房分笼饲养,首先测定每只大鼠的基础血压。将SHR大鼠随机分为卡托普利组(Cap组)、清肝祛湿颗粒大剂量组(中药大组)、清肝祛湿颗粒中剂量组(中药中组)、清肝祛湿颗粒小剂量组(中药小组)、模型对照组(Model组),健康WKY作为空白对照组(Control组),每组均雌雄个半。Cap组:用纯净水按含生药量1.5mg/ml配制成的混悬液,以1ml/100g给药灌胃,每天灌胃1次,连续灌胃四周;中药大组:用纯净水按含生药量0.36g/ml配制成的混悬液,以lml/100g给药灌胃,每天灌胃1次,连续灌胃四周;中药中组:用纯净水按含生药量0.12g/ml配制成的混悬液,以1m1/100g给药灌胃,每天灌胃1次,连续灌胃四周;中药小组:用纯净水按含生药量0.04g/ml配制成的混悬液,以1m1/100g给药灌胃,每天灌胃1次,连续灌胃四周;Model组和Control组:均予纯净水1m1/100g灌胃,每天灌胃1次,连续灌胃四周。灌胃四周期间每隔6天测量一次所有清醒安静状态下大鼠的尾动脉血压,每周每只至少连续测量3次,取其均值作为每周大鼠血压数据记录。于第四周血压测量结束后,所有大鼠在麻醉状态进行颈总动脉插管测量收缩压及舒张压水平。保存并记录数据后,采集腹主动脉血置于血清管内,室温静置1h后,在4℃下以3000r/min离心10min后,取上清液的血清于-80℃超低温冰箱冷冻保存。按照标准步骤,通过ELASA方法测量血清中血清醛固酮(ALD)、肾素(PRA)、血管紧张素Ⅰ (AngⅠ)>血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)水平。取血后快速摘取大鼠胸主动脉段,置于液氮中保存,运用Western blot技术检测profilin-1及cofilin-1水平后进行比较。上述所得数据均应用统计学软件SPSS20.0进行分析处理。结果:1.清肝祛湿颗粒对SHR血压的影响:(1)每周尾动脉血压水平比较:Control与组比较,Model组大鼠4周的血压水平均明显增高,有极显著的差异性(P<0.01)。与Model组比较,Cap组、中药中组大鼠自第一周的血压水平便有降低(P<0.05),第四周的血压水平显著降低(P<0.01);中药大组、中药小组大鼠血压水平自第二周开始血压水平呈明显降低(P<0.01)。与Cap组比较,中药中组大鼠4周的血压下降水平无明显差异;与Cap、中药中组比较,中药大、中药小组大鼠4周的血压下降水平有所不及,有明显差异(P<0.05)。(2)颈动脉插管血压水平比较:与Control组比较,Model组大鼠收缩压及舒张压水平均明显增高,有极显著的差异性(P<0.01)。与Model组比较,Cap组大鼠收缩压水平明显降低,有极显著的差异性(P<0.01);与Cap组比较,中药中组大鼠不仅收缩压水平明显降低,有极显著的差异性(P<0.01),其舒张压水平也有降低,具有差异性(P<0.01)。2.清肝祛湿颗粒对RAAS的影响:(1)肾素(PRA):与Control组比较,Model组大鼠PRA水平明显增高,有极显著的差异性(P<0.01)。与Model组比较,4组用药大鼠PRA水平均有明显降低,有极显著的差异性(P<0.01)。与中药大组、中药小组比较,Cap组大鼠PRA下降水平有显著的差异性(P<0.01),中药中组下降水平有所不及(P<0.05)。(2)血管紧张素Ⅰ(Ang Ⅰ):与Control组比较,Model组大鼠PRA水平明显增高,有极显著的差异性(P<0.01)。与Model组比较,4组用药组大鼠AngⅠ水平均有明显降低,有极显著的差异性(P<0.01)。与中药大组、中药小组比较,Cap组大鼠AngⅠ下降水平有显著的差异性(P<0.01),中药中组下降水平有所不及(P<0.05)。(3)血管紧张素Ⅱ (AngⅡ):与Control组比较,Model组大鼠PRA水平明显增高,有极显著的差异性(P<0.01)。与Model组比较,Cap、中药中组大鼠AngⅡ水平明显降低,有极显著的差异性(P<0.01);与E组比较,中药大、中药小组大鼠AngⅡ水平有所降低(P<0.05)。与Cap组比较,中药中组大鼠ALD水平无明显差异;与中药大、中药小组比较,Cap组大鼠AngⅡ下降水平有显著的差异性(P<0.01),中药中组下降水平有所不及(P<0.05)。(4)醛固酮(ALD):与Control组比较,Model组大鼠PRA水平明显增高,有极显著的差异性(P<0.01)。与Model组比较,4组用药组大鼠ALD水平均有明显降低,有极显著的差异性(P<0.01)。与中药大组、中药小组比较,Cap组、中药中组大鼠ALD下降水平均有差异性(P<0.05)。3.清肝祛湿颗粒对血管重构的影响:(1)前纤维蛋白1 (profilin-1):与Control组比较,Model组profilin-1的表达水平明显增高,有极显著的差异性(P<0.01)。与Model组比较,4组用药组大鼠profilin-1的表达水平均有降低(P<0.01)。与Cap、中药中组比较,中药大组、中药小组大鼠profilin-1的下降水平有所不及,有明显差异(P<0.01)。(2)切丝蛋白1 (cofilin-1):与Control组比较,Model组大鼠cofilin-1表达水平明显增高,有极显著的差异性(P<0.01)。与Model组比较,4组用药组大鼠cofilin-1的表达水平均有降低(P<0.01)。与Cap、中药中组比较,中药大组、中药小组大鼠cofilin-1的下降水平有所不及,有明显差异(P<0.01)。结论:1.清肝祛湿颗粒可降低SHR血压。2.清肝祛湿颗粒可降低SHR血清PRA、AngⅠ、AngⅡ、ALD水平,抑制RAAS的过表达。3.清肝祛湿颗粒可下调SHR主动脉壁profilin-1和cofifin-1蛋白表达,对高血压状态下的血管重构起到保护作用。
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