论文部分内容阅读
第一部分优化兔主动脉内皮细胞的分离培养和鉴定目的：为构建骨组织工程血管化提供种子细胞。方法：,采用血管内膜外翻和胶原酶消化法分离培养兔取主动脉内皮细胞并传代,倒置显微镜、透射电镜观察和免疫荧光鉴定。结果：鉴定培养的血管内皮细胞,倒置显微镜下观察内皮细胞呈紧密排列、短梭多角形的“鹅卵石”形态,透射电镜可见内皮细胞特征性W—P小体,免疫荧光鉴定CD31(+)。结论：兔血管内皮细胞的分离培养成功,且纯度高、数量多、状态好。本法可为骨组织工程血管化的研究提供种子细胞。第二部分骨内注射无水酒精建立兔股骨头坏死模型背景：股骨头坏死在青壮年中患病人数越来越多,它是一个具有明显高致残的疾病。目前缺少可靠的股骨头坏死动物模型来评价新的治疗方法。目的：这项研究是为了建立合适的股骨头坏死动物模型,它可以评价各种方法的疗效。方法：X线透视下将新西兰兔股骨头中心钻孔并注入无水酒精。经过2,4和6周处死动物获取股骨头。采用X射线,磁共振成像(MRI)和病理切片进行了分析和记录。结果：14天后所有的动物被证实了股骨头部分坏死。股骨头坏死的形态学改变(完整的外观形态,大体循环和关节软骨)与人类早期股骨头坏死是相似的。结论：我们建立了良好的股骨头坏死动物模型。它可以用于治疗股骨头坏死的实验研究。第三部分组织工程化凝胶诱导股骨头坏死血管化的体内实验研究目的：早期股骨头坏死的治疗仍是临床面临的挑战。内皮细胞和平滑肌细胞(EC/ SMC)已被证明在动物模型体内促进血管和骨再生。我们尝试证明：EC/SMC移植可通过促进血管生成和骨再生治疗股骨头坏死。材料与方法：先建立无水酒精诱导兔股骨头坏死模型,制作出VEGF和MCP-1的缓释微球与胶原凝胶和EC/SMC形成一个聚合物。然后将这种组织工程聚合物凝胶注射到骨坏死区域。干预后第2,4和6周,通过影像学(X光和磁共振成像)和病理学(H&E)染色和免疫组化检测股骨头坏死后血管和骨组织再生。使用Image-Pro Plus图像分析软件对新生血管密度,新生血管的直径和包被平滑肌细胞的成熟新生血管数量进行分析。利用二样本均数T检验,P<0.05具有统计学意义。结果：X线检查,MRI,组织病理学检测显示骨坏死面积缩小,新生毛细血管和新生骨修复坏死区域。免疫组化显示a-SMA(+)的血管形成。图像软件定量分析细胞/微球/凝胶组的新生血管密度,新生血管直径和a-SMA(+)的血管。明显高于其他各组。结论：骨坏死区域形成稳定和功能成熟的血管网,并证示EC/ SMC在治疗性血管再生的作用。局部注射组织工程化凝胶提供了治疗早期股骨头坏死的新方法。