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目的:通过构建一含有天然完整的乙型肝炎病毒X基因序列的真核细胞表达载体,为制备X抗体和HBx检测试剂盒的研制,以及HBVX基因及其编码蛋白(X蛋白或HBx)的生物学功能和HBx与其他宿主功能蛋白的相互作用研究提供可靠的基因材料.方法:用PCR方法从含完整乙型肝炎病毒全基因的HepG2.2.15细胞中扩增含HindⅢ和EcoR Ⅰ酶切位点的X基因序列,并对PCR产物进行DNA序列分析,将pUC118质粒及PCR产物双酶切并纯化,用连接酶将两者连接并转化感受态细胞JM109,称pUC118-HBx,再将pUC118-HBx与pcDNA3.1(+)双酶切,将pcDNA3.1(+)和X基因片段纯化并用连接酶连接,转化感受态细胞DH5 α,称pcDNA3.1(+)-HBx,并对pUC118-HBx和pcDNA3.1(+)-HBx用限制性核酸内切酶酶谱分析,PCR及DNA序列分析等方法进行检测.结果:构建的重组原核质粒pUC118-HBx和真核细胞表达载体pcDNA3.1(+)-HBx经用限制性核酸内切酶酶谱分析,PCR及DNA序列分析等方法证实含有完整的HBV X基因DNA序列.结论:1、获得了HBV X基因的重组原核质粒pUC118-HBx和真核细胞表达载体pcDNA3.1(+)-HBx,为HBx检测试剂盒的研制,为X基因与HBx的生物学功能研究和HBx与其他宿主功能蛋白的相互作用研究提供可靠的基因材料.2、经限制性核酸内切酶酶谱分析,PCR及DNA序列分析证实重组原核质粒pUC118-HBx和真核细胞表达载体pcDNA3.1(+)-HBx含有的X基因DNA序列与Genbank中的HBV ayw亚型中X基因DNA序列一致.3、探讨并优化了适合我们实验室具体操作的HBV X基因克隆条件与方法.