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大肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其发病率近年来有上升的趋势。在过去50年里通过手术切除、放疗、化疗使患者生存率稍有提高，但仍有50％的患者最终死于复发和转移。为了提高生存率、加强患者自身的抗肿瘤免疫反应，发展肿瘤特异性疫苗成为肿瘤生物治疗的关键。DC是目前所知的机体内功能最强的抗原递呈细胞。肿瘤诱导的DC功能缺陷，是肿瘤免疫逃逸机制之一。因此，如何提高DC的功能，避免肿瘤逃逸的发生，是当今肿瘤免疫治疗的研究热点之一。本实验应用肿瘤冻融抗原冲击的DC与重组人白介素-2联合应用治疗小鼠大肠癌模型，目的在于探讨其抗肿瘤的体内外机制，为其应用于临床提供实验依据。 材料： 1．雌性BALB/C鼠(H-2~d]，6-8周龄，18-22克。 2．C26来源于BALB/C(H-2~d)大肠腺癌细胞株；B16来源于C57BL/6(H-2~b)黑色素瘤细胞株。 方法：1.DC制备及鉴定: 无菌制备BALB/C小鼠骨髓细胞，去除红细胞，在粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素一4协同诱导下，在体外培养7d，收获细胞即为DC。随后对收集的DC进行HE染色和流式细胞仪鉴定。2.DC的抗原冲击致敏: 在体外，反复冻融的C26细胞裂解液与DC共培养16h，完成DC的抗原冲击过程。3.DC束lJ激T细胞增殖实验: 在体外，无菌制备荷瘤BALB/C小鼠的脾脏T细胞，用 3H一胸腺嚓睫核营掺入法，在ne:T为l:100，l:330，l:1000三种t匕例，分三组检测cpm值。其中，第一组为抗原冲击的DC;第二组在培养体系中加入50Ou/ml重组人白介素一2，其余与第一组相同;第三组为抗原未冲击的DC。4.DC诱导cTL杀伤实验: 抗原冲击致敏的DC在体外诱导荷瘤鼠脾脏T细胞为CTL细胞，应用MTT法，在效靶比为50:l，25:l，1 2.5:1，6.25:l时，测量其CTL细胞对C26细胞和B16细胞的杀伤率。5.动物实验: 以lx105/只在BALB/C右腰背部外侧皮下接种C26细胞，随机分为四组，即;对照组、IL一2治疗组、抗原冲击DC治疗组、抗原冲击DC与IL一2联合治疗组，每组7只，治疗从荷瘤第ld开始共4w，方案如下:IL一2治疗组lxlo乞/d，5次/w，瘤周皮下注射;抗原冲击DC治疗组lx1o勺次，1次/w，右腹股沟皮下注射;抗原冲击DC与IL一2联合治疗组为上述IL一2治疗组和抗原冲击DC治疗组两个方案的联合。从荷瘤第lld开始，每隔Zd测一次肿瘤大小并观察荷瘤鼠的生存期。结果:1.DC的鉴定: 倒置显微镜下见;细胞呈树突状、伪足状突起，HE染色核偏位，嗜硷性。流式细胞仪鉴定为髓系DC(CD 11c+)，高表达MHCll类分子(Ia)及共刺激分子郑州大学(2 003)研究生毕业论文树突状细胞和白细胞介素佗联合对小鼠大肠瘤治疗的实验研究(CD40，CD80，CD86)。2.DC刺激T细胞增殖实验: 3H-TdR掺入法检测发现，3种梯度的冻融抗原冲击的DC与抗原未冲击的DC相比均能明显的刺激荷瘤鼠脾T细胞增殖，并且随着抗原冲击的DC与T细胞比例的提高，“H一TdR的摄入量逐渐增加。而培养体系中加入几一2能进一步提高T细胞增殖能力，经LSD检验，在于0.05水准，可以认为加入IL一2与未加入几一2两组具有显著性差异护<0.05)。3.DC诱导的CTL杀伤实验: 在效靶比为50:1，25:1，12.5:1，6.25:l时，对C26肿瘤细胞杀伤率分别为68.84%，58.36%，41.560，0，24.96%，而此eTL对B16肿瘤细胞杀伤作用很弱(杀伤率<6%)，说明肿瘤细胞冻融抗原冲击致敏的DC诱导的CTL具有抗原特异性。4.荷瘤小鼠的肿瘤体积: 3种治疗方案对肿瘤生长影响不同，具有统计学意义(P<O.OS)。治疗各组与对照组相比较均有明显的抑瘤作用(P<0 .05)，联合治疗组的治疗作用优于其余.各组，具有显著性差异(P<0.05)，而几一2组和抗原冲击DC组无显著性差异 (P>0.os)。并且随着荷瘤时间的延长，联合治疗组显示了更有效的抑瘤作用。5.荷瘤小鼠的生存期: 各组平均生存期分别为:对照组(30.43土1 .43)d;IL一2组(38士2.89)d;抗原冲击DC组(57士2.76)d;联合治疗组(75.43士3.9)d。采用Kaplan一Meier法，应用时序检验，不分层对各水平作两两比较结果显示:治疗各组的生存期与对照组比较均有显著性差异(P<0.05);多次接种抗原冲击的DC较单独应用几一2更能延长荷瘤小鼠的生存期(P<0.05)联合治疗组与其余各组比较能进一步的延长荷瘤小鼠的生存期(P<0.05)。结论:1.月中瘤冻融抗原冲击的DC具有刺激T细胞增殖的功能，IL一2增强这一功能。2.肿瘤冻融抗原冲击的DC诱导的CTL具有特异性杀伤作用。3.肿瘤冻融抗原冲击的DC对肿瘤的治疗具有远期效应。4.皮下低剂量的给予IL一2与肿瘤冻融抗原冲击的DC联合应用，具有抗肿瘤效果，郑州大学(2003)研究生毕业论文树突状细胞和白细胞介素一联合对小鼠大肠店治疗的实毅研究 为肿瘤治疗提供了一条新的思路。5.使用不同的治疗方案给予几一2是减少IL一2毒副作用的一条途径。6.肿瘤冻融抗原冲击的DC与IL一2联合应用提高了抑瘤作用，延长荷瘤小鼠的生 存期，因此，联合治疗具有协同作用。