【摘 要】
：
目的构建含过氧化氢酶基因的重组腺病毒,并探讨其对培养的血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响.方法利用细菌内同源重组法构建制备含过氧化氢酶基因的重组腺病毒.先自过氧化氢酶
论文部分内容阅读
目的构建含过氧化氢酶基因的重组腺病毒,并探讨其对培养的血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响.方法利用细菌内同源重组法构建制备含过氧化氢酶基因的重组腺病毒.先自过氧化氢酶质粒载体pZeoSV2-Cat中酶切出过氧化氢酶cDNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-Cat,再转化含pAdEasy-1的超感受态大肠杆菌BJ5183,采用细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdEasy-1-Cat;经PCR的方法鉴定为阳性克隆后,用Pac Ⅰ酶切线性化pAdEasy-1-Cat,转染Ad-293细胞,包装成重组腺病毒颗粒;大量扩增,用氯化铯超速梯度离心纯化获取高滴度的重组腺病毒AdCat.并转染人血管平滑肌细胞,用Western印迹法分析细胞中过氧化氢酶表达的情况.采用MTT比色法、流式细胞术、TUNEL法和Hoechst33258染色等方法,研究其对血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响.结果成功构建并扩增、纯化含过氧化氢酶基因的重组腺病毒AdCat,滴度为4.12×10<12>OPU/mL.AdCat转染血管平滑肌细胞后,细胞中过氧化氢酶表达水平明显增强;MTT比色法测定的不同时相的细胞吸光度值明显低于对照组(第2天P<0.05,第3-5天P<0.01);血管平滑肌细胞的细胞周期中G<,0>/G<,1>期分布百分率显著高于空白对照组,而S、G<,2>/M期分布百分率显著低于空白对照组(P<0.01);DNA直方图可见到明显的亚二倍体峰,与对照组比较凋亡率明显增加(P<0.01);经TUNEL染色后,在10个不同视野下进行细胞计数,凋亡细胞明显多于空白对照组,两者之间有明显差异(P<0.01);经Hoechst33258染色后,凋亡细胞明显多于空白对照组.结论AdCat转染血管平滑肌细胞后可增强过氧化氢酶表达水平,抑制血管平滑肌细胞的生长、增殖,诱导细胞发生凋亡.腺病毒载体介导的过氧化氢酶基因转染可能是防治PTCA术后再狭窄的一种新途径.
其他文献
从黄色到黑色 记录生命的赠予与青春的芳华 从浓密到稀疏 蕴含风霜的洗礼与成熟的优雅 从黑色到白色 见证日月的升起与乾坤的春夏 充滿情感的根部 深知头皮的酸甜苦辣 在风云变幻的日子里 挡住岁月的风吹雨打 轻轻地飘落了 回眸眷恋着头上的光滑 带着深深的思念跌落在泥土里 在故乡的春天里悄悄地发芽 耳朵 静静地守卫在脑袋两边 像一对无声对称的风铃 聆听天地间所有的秘密
我爱三月的暖风 因为风中有你 飘起的红裙 我爱三月的芬芳 因为漫山遍野 有春天的姹紫嫣红 我爱三月的翠绿 因为麦田有 农民的辛勤劳动 我爱三月的风铃 因为古格窗棂上 演奏着浪漫的音魂 我爱三月的燕子 在忙碌衔泥中穿梭 倾注着爱巢的情濃 我爱三月放飞的纸鸢 野外还有放学归来 欢声笑语的单纯 我爱三月运河水的碧波 它荡漾着古老 纤夫号声的传颂 我爱三月蔚蓝的天
他借阳光树影纳凉，借月亮记录时间 借石头压住故事以防飘散于时光的风里 东风解冻，鱼陟负冰 重复几十年来先辈们曾完成的事 他将和田间地头的祖先们唱起同一首歌 接过一把锄头和一捧种子 他十指粗糙，双脚赤裸 躺在金黄的稻谷上，抚摸大地的骨节 只抬手，就在高悬的枝头采下一片叶子 叶子蜷缩，发出清亮的声音 他缄默，远望 等待着下一场雨的到来 她又开始准备艾草和菖蒲了 如同重阳准备菊
窗台上慵懒的猫咪 将暑气淡在喝的水里 摇曳在我眼中的柳枝 想要编织一些诗情画意 被炙烤得滚烫的公园长椅 已然没有 情侣留下来的痕迹 我本来想窝在沙发上 看自己喜欢的电影 聒噪的蝉声揭开了序曲 散慢在街上也驱不走我的躁意 走到常去的那家冷饮店 我遇到了你 黑发飘逸 眸子穿透了我 迷人的气息 心脏猛跳 地球撞到了火星 你在一瞬间离去 残留暗香 从此以后 我把关于你的一切寻
初春微风拂过 掀起泛黄的发丝，思绪万千 屋外，摇曳着的小黄菊袭来阵阵清香 伴我入睡，梦中尽是你的画面 当星星挂满天际 你可知，那是我日夜的思念 仲夏烟雨朦胧 撑着熟悉的小伞，忧愁满腹 车道上，一辆辆车从身边飞驰而过 终不见，那个熟悉的背影 我落寞离场 当雨滴汇聚成溪 你可知，那是我心酸的泪水 深秋白霜覆盖 记不清曾经的誓言，只剩遗憾 田野里，丰硕的果实投来无情的嘲笑
本实验分为两个部分：(1)研究自然病程情况下，髂内动脉结扎大鼠阴茎勃起功能和阴茎海绵体组织神经型一氧化氮合酶(nNOS)神经纤维数目以及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的变化；(2)
5岁半的婷婷在北京一家幼儿园上学，她每天早上起床时．都会习惯性地看行窗外，
从你我日常分离 去一个叫花乡茶谷的地方 你要牵着我的手 走在石板路 看寨子 看湖 看深绿浅绿的小草 你要牵着我的手 走在遇诗桥 看云 看风 看水中影像 不愿分开 你要牵着我的手 走在未命名的山坡 看一棵树靠近另一棵 看一只鸟儿呼唤另一只 看时光 将两个名字温柔修辞 在花乡茶谷 你要一直牵着我的手 遇诗桥 花乡茶谷的 遇诗桥 名字和景色 都很美 但怎比 我