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miRNA是一种与靶基因的转录体m RNA互补的内源性非编码RNA,在真核细胞中广泛存在,参与了动物、植物、病毒、细菌中多种生理或病理过程的调控。为挖掘与从江香猪脂肪沉积相关的miRNA,结合课题组前期对PRKAA1基因在脂肪细胞中的生物学功能研究,以PRKAA1为靶基因,寻找并验证与PRKAA1基因存在靶位点的miRNA。本研究以贵州从江香猪作为研究材料,利用软件、高通量测序、RNAhybrid软件筛选出与PRKAA1基因相关的miRNA,通过分子克隆、实时荧光定量PCR、原代细胞的培养、诱导分化、细胞转染等技术,检测筛选miRNA及脂肪沉积相关基因在从江香猪各组织及前体脂肪细胞诱导过程表达水平,分析其在脂肪细胞分化中的调控作用,其主要研究结果如下:（1）从江香猪PRKAA1基因相关miRNA的筛选及其在组织中的表达规律通过SWChen2.3软件以PRKAA1基因的3’-UTR和miRNA的种子区序列筛出PRKAA1基因相关miRNA,再结合高通量测序结果,利用Venny2.1在线软件寻找共有的miRNA,选取miR-22-3P、miR-143-3P这2个miRNAs为研究对象,运用茎环法设计引物,成功构建p MD-19-miR-22-3P、p MD-19-miR-143-3P载体,检测这2个miRNAs在从江香猪各组织表达水平,结果发现miR-22-3P表达量在小肠、舌、腿肌中极显著高于肺、肝、大肠、胸肌、脾、肾、心、皮下脂肪、睾丸（P<0.01）,在小肠中极显著高于舌、腿肌（P<0.01）;miR-143-3P在组织中表达量最高为肺,极显著高于大肠、舌、小肠、心、肾、睾丸、腿、脾、肝、胸、皮下脂肪（P<0.01）,其次在大肠、舌、小肠、心这4个组织中极显著高于其他7个组织（P<0.01）;miR-143-3P表达量在小肠、舌、脾脏、腿肌、大肠、肾、心、肺、睾丸这9个组织都极显著高于miR-22-3P（P<0.01）,miR-22-3P在肝脏和胸肌中极显著高于miR-143-3P,在皮下脂肪中miR-22-3P、miR-143-3P均为低表达且差异不显著（P>0.05）。（2）miR-22-3P、miR-143-3P在从江香猪原代脂肪细胞诱导分化中的表达分析分离培养3日龄的从江香猪的皮下、肌内前体脂肪细胞,实时荧光定量PCR1检测miRNA和PRKAA1基因在细胞诱导分化48 h、60 h、72 h、96 h、120 h后的表达量。结果显示:miR-22-3P、miR-143-3P在皮下、肌内前体脂肪细胞诱导分化过程中,诱导分化48 h、72 h、96 h时表达趋势呈逐渐下降,而在诱导分化120 h时表达量增加,在48 h时表达量最高且极显著高于72 h、96 h和120 h,在诱导分化96 h时表达量最低;PRKAA1基因在皮下、肌内前体脂肪细胞诱导分化48 h、72 h、96 h时表达量呈上升趋势,在120 h时表达量下降,在诱导分化96 h时表达量极显著高于其他时间（P<0.01）;脂肪沉积相关基因LPL、HSL、PPARγ在诱导分化过程中96 h时表达量最高,LPL在皮下、肌内前体脂肪细胞中为低表达,而在肌内前体脂肪细胞诱导分化96 h时极显著高于其他时间（P<0.01）,HSL与PPARγ在诱导时间48 h、72 h时表达量呈下降趋势,诱导96 h时表达量极显著高于其他时间（P<0.01）。（3）miR-22-3P、miR-143-3P与PRKAA1基因靶位点验证构建分别含有miR-22-3P、miR-143-3P与PRKAA1基因3’-UTR靶位点的双荧光蛋白载体,与合成的miR-22-3P mimics、miR-143-3P mimics转染至293T、LNCap、皮下前体脂肪细胞、肌内前体脂肪细胞,利用倒置荧光显微镜观察细胞发光情况,酶标仪检测发光强度,q RT-PCR检测PRKAA1靶基因及脂肪沉积相关基因PPARγ、HSL、LPL m RNA表达情况。结果显示:在转染至293T、LNCap后,miR-22-3P mimics+双荧光蛋白载体质粒组和miR-143-3P mimics+双荧光蛋白载体质粒组的发光细胞数和荧光强度极显著低于含靶位点双荧光蛋白质粒+NC组（P<0.01）;PRKAA1基因在皮下、肌内前体脂肪细胞中,转染miR-22-3P mimics组、miR-143-3P mimics组表达量均极显著低于NC组（P<0.01）;脂肪沉积相关基因LPL、HSL、PPARγ转染miR-22-3P mimics组、miR-143-3P mimics组表达量都低于NC组,在肌内前体脂肪细胞中,转染miR-143-3P mimics组显著低于NC组（P<0.05）,转染miR-22-3P mimics组表达量低于NC组,差异不显著（P>0.05）,在皮下前体脂肪细胞中,转染miRNA mimics组表达量极显著低于NC组（P<0.01）。综上,本研究筛选出2条与从江香猪PRKAA1基因相关miRNA:miR-22-3P和miR-143-3P,且2条miRNAs在从江香猪不同组织中均有表达,寻找与PRKAA1基因3’-UTR存在靶位点,这2条miRNAs可能通过调控脂肪沉积相关基因的表达来影响从江香猪的脂肪沉积。