菊花,原产中国,是一种在世界范围内广受欢迎的观赏植物。菊花植物品种繁多,在花色、瓣型、花期、抗性和株型等方面均具有丰富的变异,其中有关花色的研究是传统热点。前人的报道已验证了MYB基因家族对植物花色以及其他多种生理性状均具重要的调控功能。本研究我们针对经全基因组测序的、遗传背景相对简单的菊花二倍体野生种菊花脑（Chrysanthemum nankingense）基因组中的276个MYB基因进行高保真克隆,将成功克隆出的60个MYB基因在白花矮牵牛中进行异源、混池过表达,对产生的转基因植株进行初步的表型鉴定,以研究菊花脑MYB基因的功能;初步探索了通过混池表达实现快速筛选目标MYB基因并用于后续研究这一方法的可行性。研究结论如下:1.根据菊花脑的基因组信息,我们找到了276个MYB基因。用高保真EVO酶进行一轮扩增,由于叶片组织的特异性表达以及凝胶电泳分析比对,最终成功克隆出60个MYB基因。2.构建GFP和production of anthocyanin pigment 1（PAP1）过表达载体并侵染矮牵牛叶片,侵染后28天,OD600=0.4的愈伤组织比例为86.15%,发芽率为10.76%;OD600=0.6时愈伤组织的比例为73.1%,发芽率为3.60%,因此相对较低的菌液浓度更利于愈伤组织的分化。除此之外,叶片的含水量也会影响遗传转化效率。综合以上因素,在第28天,约70%-80%的叶片出现了愈伤组织,约10%的叶片出现了小芽,60天左右可以获得转基因矮牵牛。3.将60个MYB基因分为7组,采用混池转化的方法将7组基因异源过表达至矮牵牛。对移栽出的转基因小苗进行验证,结果显示90%以上的植株为阳性,共获得99棵过表达矮牵牛（T0植株）。将T0植株的种子进行播种,发芽率在20%-70%之间。其中G2-10、G2-12、G2-17、G6-8、#117-1、#117-2、G2-4、G2-6、G2-9、G2-18、G2-26和G7-3的阳性植株比例均达到100%（G=Group）,因此可以稳定遗传。4.转基因植株G3-1和G3-2两个株系的叶片明显变大,叶片的形状呈现出心形而不是普通的椭圆形,花朵直径增加,通过PCR分析发现两个株系均只转入MYB158基因。除此之外,在茎粗和叶片厚度也有明显加大的表型。通过流式细胞仪测定发现这两个株系变为4倍体,细胞面积也增大。5.在菊花脑中,MYB158的表达具有明显的组织特异性,根中基本没有表达,茎和叶中有表达且叶中的表达量最高。在花器官中,花蕾、管状花、舌状花都基本没有表达量。6.将菊花脑MYB158异源过表达至矮牵牛获得两个过表达株系158-1和158-2,在表型上和野生型无明显差异,经流式细胞仪测定,倍性无改变,仍为2倍体。后将菊花脑MYB158异源过表达拟南芥,共获得32棵阳性植株,叶片面积较野生型拟南芥略有变大,通过细胞水平测定,倍性无改变,为2倍体,但核内周期有一定的变化。7.菊花脑MYB158基因在野生型矮牵牛中的含量为0,在过表达植株158-1和158-2中的含量略有上升,在混池转化的G3-1和G3-2中含量呈明显上升,表明植物倍性的增加会导致基因表达量的上升。