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鸡源疾病种类繁多,随着养禽业的迅速发展,对禽病的早期诊断和控制尤显重要。鸡血清中IgG水平的测定,已是临床免疫检验和体液免疫研究的常用指标。抗鸡IgG的单克隆抗体与常规免疫血清相比,具有特异性高,效价稳定等优点,研制抗鸡免疫球蛋白单克隆抗体旨在为多种禽病的诊断提供高质量、标准化试剂,对进一步研究鸡传染病具有十分重要的现实意义。本论文分为两部分,第一部分主要研究了鸡血清免疫球蛋白的分离纯化,第二部分主要是建立了检测鼠抗鸡IgG抗体的间接ELISA方法。应用硫酸铵分步沉淀和乙醇沉淀两种方法粗提鸡血清免疫球蛋白,将两种方法提取的免疫球蛋白用进行SDS-PAGE电泳检测,实验结果显示,两种方法粗提的免疫球蛋白都较纯,硫酸铵盐析获得的免疫球蛋白得率大,乙醇沉淀粗提的免疫球蛋白得率小。然后将两种方法粗提的免疫球蛋白过SephadexG-200凝胶柱进一步分离纯化鸡血清IgG,经免疫电泳和SDS-PAGE电泳检测,纯化的IgG达到了电泳纯,SDS-PAGE电泳可见纯化的鸡IgG出现两条带,分别为其重链和轻链,免疫电泳结果只出现一条带,纯度较高。且得知IgG重链(H链)的分子量大约为65KD,轻链(L链)的分子量为25KD。Folin-酚法测得层析蛋白浓度为1mg/mL,满足了后续实验的要求。用纯化的鸡血清IgG作为抗原,以皮内多点注射大白兔及其昆明系普通小鼠制备兔抗鸡IgG免疫血清和鼠抗鸡IgG免疫血清。采用酶联免疫吸附实验(Enzyme LinkedImmunosorbent Assay)和琼脂扩散实验测多克隆抗体效价,兔抗鸡血清IgG抗体琼扩效价达到1:8,ELISA效价达到1:512000,鼠抗鸡血清IgG抗体琼扩效价为1:2,ELISA效价为1:128000。本研究还建立了筛选阳性杂交瘤细胞的间接ELISA法,通过方阵法优化出以下最佳反应条件。鸡IgG包被的间接ELISA筛选方法:抗原最适包被量为0.5μg/mL,阳性和阴性血清稀释度为1:2000,酶标抗体羊抗鼠IgG-HRP的稀释度为1:10000,底物液作用最佳反应时间为20min。