【摘 要】
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利用RACE法和染色体步移法从团花树形成层中成功克隆了AcXET1基因,通过生物信息学分析,确定该基因全长1205bp,包含了一个完整的开放阅读框912bp,编码一个含303个氨基酸的蛋白
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利用RACE法和染色体步移法从团花树形成层中成功克隆了AcXET1基因,通过生物信息学分析,确定该基因全长1205bp,包含了一个完整的开放阅读框912bp,编码一个含303个氨基酸的蛋白序列。通过NCBI上的BLAST分析,该氨基酸序列与猕猴桃、苹果、月季、杂交杨、石刁柏的XET基因的氨基酸序列同源性均在70%以上；且该蛋白序列包含与XET基因功能相关的两个结构域；以上说明所克隆的序列是团花树XET基因序列。为了解该基因功能,除了对该基因进行了一系列生物信息学分析,还将该基因的开放阅读框重组入植物表达载体pBI121的多克隆位点XbaI和SmaI之间,获得的重组载体命名为pBIAcXET1,并通过农杆菌介导的叶盘转化法将外源DNA转入烟草中并获得抗性植株,通过PCR和PCR-Southern检测,外源基因已成功整合进入烟草基因组DNA中。通过观察,转基因植株与野生型植株的组培苗在外形上差异不大。通过石蜡切片观察分析了转基因植株茎段的横切面及纵切面细胞形态变化。
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