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帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种中老年人常见的中枢神经系统慢性病,其特征性的临床表现是震颤、肌肉僵直、步态不稳等,严重影响患者的正常生活。引发该病的直接原因是大脑黑质多巴胺能神经元细胞变性缺失导致多巴胺(Dopamine,DA)含量减少,这一病理的改变,普遍认为与氧化应激、年龄老化、环境影响和家族遗传等因素有关。现有的治疗方法主要是西药左旋多巴替代疗法和丘脑底核电刺激术,前者常有并发症发生且药物价格昂贵,而后者定位难、风险大,这些问题引发了学者们对中草药治疗PD的研究兴趣。有研究发现,传统中药红景天的活性成分红景天苷(Salidroside,Sal)能够有效对抗氧化应激,从而起到保护多巴胺能神经元的作用。因此,建立快速、可控、高效、稳定的测定Sal干预前后DA及相关神经递质(5-羟色氨酸、3,4-二羟基苯乙酸、5-羟吲哚乙酸、高香草酸)含量的方法,对于研究其对PD的神经保护作用有重要意义。本论文包括以下四个部分:1.文献综述介绍了帕金森病的临床症状、病机病因、治疗方法,尤其是传统中草药红景天中的Sal对神经系统的保护和治疗作用,同时对近年来常见的测定神经递质含量的方法及其特点进行了评述。2.MPTP诱导的PD小鼠模型的建立及其评价利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)可导致DA能神经元细胞凋亡这一研究基础,建立了 MPTP诱导的PD小鼠模型,并对其进行了行为学评价和神经元形态学评价。悬挂和爬杆测试结果显示,实验小鼠注射MPTP后,出现了明显的运动协调障碍,但施以不同浓度Sal干预后,其PD症状得到一定的缓解;免疫荧光染色结果显示,在光镜下观察TH阳性细胞和DAT阳性神经元数目,模型组小鼠脑组织中黑质内两种神经细胞数目与正常组相比均显著减少,而施以不同浓度Sal干预后,其数目的下降趋势有一定程度地减慢,减慢的程度与Sal的浓度呈正相关。说明Sal能明显缓解PD症状,抑制TH阳性细胞和DAT阳性神经元的减少,推测其对PD有一定的神经保护作用。3.小鼠脑组织中五种神经递质及其代谢产物分析方法的建立建立了小鼠脑组织5种神经递质及其代谢产物定性、定量分析的反相高效液相色谱-紫外检测(RP-HPLC-UV)法,采用岛津VP-ODS C18色谱柱,在流动相A为水+0.1%TFA,流动相B为甲醇+0.1%TFA,流速1.0 mL/min,检测波长280 nm的条件下,分别对DA,5-HTP和DOPAC,5-HIAA和HVA 5种神经递质及其代谢产物对照品进行测定,各组分均达到了基线分离;考察了该方法的精密度、稳定性和加标回收率,结果显示,该法在其测定范围内峰面积与对照品浓度呈良好的线性关系,加标回收率在91.5%～96.0%之间,相对标准偏差低于5.0%,表明该方法简单、可靠、重现性好,适合对所建立的MPTP诱导的PD小鼠模型进行神经生化评价。4.小鼠脑组织中五种神经递质及其代谢产物的含量测定与鉴定利用所建立的5种神经递质及其代谢产物定性、定量分析的RP-HPLC-UV法,对PD小鼠模型中Sal干预前后脑组织中5种神经递质及其代谢产物的含量进行了测定,并采用LC-MS、ESI-MS与对照品确认,DA、5-HTP、5-HIAA和HVA均被证实存在于样品中。含量测定结果显示,模型组小鼠纹状体内DA、5-HTP、DOPAC、5-HIAA和HVA含量明显低于正常组,施以不同浓度的Sal干预后,各物质含量有所上升,且与Sal浓度呈正相关。说明Sal显著抑制了 MPTP诱导的小鼠脑组织中DA等5种神经递质含量的减少,对PD有一定的神经保护作用。