核酸适配体是一种可以与特定靶标分子特异性结合的单链DNA分子或者单链RNA分子,可以与核酸适配体结合的靶标分子范围非常的广,小到无机粒子、有机分子、蛋白分子,大到细胞、组织都可以是核酸适配体的靶标。核酸适配体具有高特异性,高亲和力,合成成本低,合成纯度高,性能稳定,运输和储存成本低等优势,因此核酸适配体已经广泛的应用于生命科学研究、药物筛选、靶点鉴定、环境监测等各个领域。核酸适配体的制备过程被称为“配体指数富集系统进化”技术,即SELEX技术。前白蛋白是由肝细胞合成的一种血清蛋白质,正常人血清中前白蛋白的含量是200-400mg/L,在肝硬化患者体内含量异常,是肝硬化患者肝脏病变检测的敏感指标。本文的工作围绕着磁珠-SELEX技术筛选前白蛋白的核酸适配体展丌,实验包括初始寡核苷酸随机文库设计,磁珠-SELEX法筛选、Q-PCR扩增、单链的分离和制备以及12%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测亲和力等实验环节,但是该筛选工作并没有得到正向筛选结果。细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的主要组成成分,又被称为脂多糖(LPS),是检测革兰氏阴性菌病原体感染的标志物。本文通过两条能够与内毒素高亲和力相互作用的核酸适配体,成功的构建了细菌内毒素与其两条核酸适配体相互作用形成的三明治夹心结构复合物,并在此基础上制备出可用于检测细菌内毒素的磁珠适配体传感器。通过激光共聚焦显微镜(LSCM)观察磁珠表面三明治夹心结构复合物中核酸适配体B9末端修饰的羟基荧光素在488nm激发光和525nm发射光的荧光发光,从而确定细菌内毒素与其两条核酸适配体B2和B9能够形成三明治夹心结构复合物。磁珠适配体传感器在BSA蛋白、蔗糖、葡萄糖、tRNA共存的溶液中的检测细菌内毒素,其检测灵敏度可以达到10-8mg/mL。在10-8-100mg/mL的浓度范围内随着溶液中细菌内毒素浓度的增加,磁珠适配体传感器检测细菌内毒素捕捉到的荧光信号也随之增强。结合有细菌内毒素的磁珠适配体传感器在加热到95℃的条件下可以实现多次再生以及再生后重复使用。本实验中,经过七次再生后的磁珠适配体传感器用于检测溶液中的细菌内毒素的性能稳定,其相对标准偏差仅为5.5%。磁珠适配体传感器检测溶液中的细菌内毒素操作简单,基于流式细胞仪96孔板检测时,可以同时处理数十至上百个样品而不增加更多的时间成本和经济成本。同时,用流式细胞仪96孔板自动进样检测可以在30min左右的时间快速的获得96个样品的检测结果。磁珠适配体传感器检测时的样品消耗量少,检测结果重复稳定性好,受到杂质和细菌内毒素共存物的影响可以忽略不计。这种基于流式细胞仪检测的磁珠适配体传感器,为自动化和高通量检测溶液中的细菌内毒素的含量提供了可能。