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[目的]
本研究拟观察小檗碱(berberine)对体外培养的人早幼粒白血病细胞株HL-60细胞的增殖、凋亡的影响,并初步探讨其与人血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growthfactor receptor-2,VEGFR2)表达的影响。
[方法]
体外培养HL-60细胞株,取对数生长期的细胞用于实验研究。倒置显微镜下观察小檗碱作用HL-60细胞后细胞形态的变化;采用CCK-8试剂盒检测不同浓度小檗碱作用HL-60细胞不同时间点的细胞生长抑制率;用流式细胞术检测HL-60细胞周期及细胞凋亡率的变化;Hoechst33258染色检测HL-60细胞凋亡情况;RT-PCR检测VEGFR2 mRNA的含量变化,Westernblot检测VEGFR2蛋白表达的变化。
[结果]
(1)细胞生长形态学观察:终浓度为6μg/ml、12μg/ml、24μg/ml、48μg/ml、96μg/ml小檗碱作用HL-60细胞12h、24h,细胞随着小檗碱浓度的增加,与对照组比较,细胞形态变化不明显;小檗碱作用细胞36h、48h,随着药物浓度的增加,镜下可见细胞胞体逐渐变小,部分细胞碎裂、可见较多细胞碎片。药物浓度越高,细胞密度越小,碎片越多。
(2)终浓度为6μg/ml、12μg/ml、24μg/ml、48μg/ml、96μg/ml小檗碱作用HL-60细胞12h、24h,随着小檗碱浓度的增加,细胞抑制率变化不明显;药物作用36h、48h,随着药物浓度的增加,抑制率逐渐增高。实验组与对照组相比较,差异具有统计学意义(F=15.236,P<0.01)。不同时间段组之间相互比较,差异亦具有统计学意义(F=4.618,P<0.05)。
(3)流式细胞术检测结果:终浓度为6μg/ml、12μg/ml、24μg/ml、48μg/ml、96μg/ml小檗碱作用HL-60细胞36h后,随着小檗碱浓度的增加,G1期细胞百分比增加,S期细胞百分比减少,实验组与对照组相比较,差异具有统计学意义(F=54.421,P<0.01)。同时,HL-60细胞的凋亡率随着小檗碱浓度的增加而增加,实验组与对照组相比较,差异具有统计学意义(F=1473.964,P<0.01)。
(4)终浓度为6μg/ml、12μg/ml、24μg/ml、48μg/ml、96μg/ml小檗碱作用HL-60细胞36h后,经Hoechst33258染色,观察到染为高亮蓝色的典型凋亡小体,其细胞核明显固缩、凝聚和断裂,随着小檗碱浓度的增加,出现凋亡小体的细胞明显增多。而对照组细胞核染色均匀。
(5)RT-PCR、Westernblot检测VEGFR2 mRNA及蛋白的表达:终浓度为6μg/ml、12μg/ml、24μg/ml、48μg/ml、96μg/ml的小檗碱作用HL-60细胞36h后,细胞VEGFR2 mRNA及蛋白表达呈递减趋势,与对照组比较,差异具有统计学意义(F=8.699,P<0.01;F=4.408,P<0.01)。
[结论]
(1)小檗碱具有抑制HL-60细胞增殖、诱导其凋亡的作用。
(2)小檗碱能降低HL-60细胞的VEGFR2表达。