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胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,其高发病率及高死亡率严重影响人们的健康。由于早期胃癌症状不典型,多数患者确诊时已处于进展期,错过了手术治疗最佳时期,因此,靶向药物的治疗就显得至关重要,而靶向治疗的关键是靶点的确定。目前研究发现,心房钠尿肽受体-A（natriuretic peptide receptor-A,NPRA）在多种肿瘤组织中高表达,且与肿瘤细胞的恶性行为有关。体外研究发现,NPRA基因沉默可以抑制前列腺癌、食管鳞癌、乳腺癌等肿瘤细胞的生长、侵袭和转移,但其在胃癌中的研究较少,而作为胃癌潜在药物作用靶点的研究目前国内外尚未见报道。Akt/mTOR通路是经典的信号传导通路,在正常细胞的多种生物学功能中起中心调控作用,在肿瘤细胞生物活性中的作用研究也较为成熟。多种原癌基因通过激活Akt/mTOR通路发挥原癌作用,而抑癌基因则可抑制该通路激活。在肺癌、结肠癌、乳腺癌、血管瘤等多种肿瘤中Akt/mTOR通路过度激活,与肿瘤细胞的增殖活性、侵袭转移能力等有关。细胞骨架微管蛋白β-Tubulin在胃癌中的研究较少,近年来研究发现胃癌组织中β-Tubulin基因呈高表达状态,推测β-Tubulin与胃癌发生发展有一定的关系。我们课题组前期实验已经证明,在胃癌细胞中Akt/mTOR通路可调节细胞骨架蛋白的表达。然而,NPRA是否通过调节Akt/mTOR通路和细胞骨架β-Tubulin影响胃癌细胞的增殖、迁移国内外尚未见报道。本实验以人胃癌细胞MGC-803为研究对象,利用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术沉默细胞中NPRA基因,探讨NPRA基因对胃癌细胞增殖和迁移的影响及机制,为NPRA成为胃癌的靶向治疗的潜在药物作用靶点提供新思路和理论依据,本研究分两个部分进行:第一部分NPRA基因沉默对胃癌细胞MGC-803增殖、迁移的影响目的:观察NPRA基因沉默对胃癌细胞MGC-803增殖和迁移能力的影响。方法:1.利用Rfect小核酸转染试剂将si-NPRA和阴性对照si-NC分别转染人胃癌MGC-803细胞,并标记为si-NPRA组、si-NC组,以不做任何处理的803细胞作为空白对照组（Blank组）。2.转染24h后,q RT-PCR、Western Blotting实验检测各组细胞中NPRA的m RNA及蛋白表达量的变化。3.Cell Counting Kit（CCK-8）实验检测转染6h、24h、48h后,各组MGC-803细胞增殖活性的变化。4.转染24h后,划痕实验检测各组MGC-803细胞迁移能力的变化。结果:1.QRT-PCR和Western blotting结果显示,si-NPRA组中NPRA的m RNA及蛋白表达水平均明显降低。2.CCK-8实验结果显示,si-NPRA组MGC-803细胞的增殖活性明显降低。3.划痕实验结果显示,si-NPRA组MGC-803细胞的迁移能力明显降低。小结:NPRA基因沉默可明显抑制MGC-803细胞的增殖和迁移能力。第二部分NPRA基因沉默抑制胃癌细胞MGC-803增殖和迁移与Akt/mTOR信号通路及微管蛋白β-Tubulin之间的关系目的:在第一部分实验结果的基础上,探讨siRNA靶向沉默NPRA基因后Akt/mTOR信号通路及细胞骨架蛋白β-Tubulin与胃癌细胞MGC-803增殖、迁移之间的关系。方法:1.利用Rfect小核酸转染试剂将si-NPRA转入人胃癌MGC-803细胞,同时设置阴性对照组（转入si-NC）和空白对照组（Blank组）。2.q RT-PCR检测各组中Akt/mTOR信号通路关键蛋白Akt、mTOR及微管蛋白β-Tubulin m RNA表达水平的变化。3.Western Blotting检测各组中Akt/mTOR通路关键蛋白总Akt、磷酸化Akt（Ser473）（p-Akt-Ser473）、总mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）及微管蛋白β-Tubulin蛋白表达水平的变化。4.各组实验数据应用软件Graph Pad Prism 8进行统计分析。结果:1.Akt/mTOR信号通路关键蛋白Akt、磷酸化Akt（Ser473）（p-Akt-Ser473）、mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）及微管蛋白β-Tubulin在MGC-803细胞中均有表达。2.与si-NC组相比,si-NPRA组细胞中Akt/mTOR信号通路关键蛋白p-Akt、p-mTOR表达水平明显降低;而AKT、mTOR的m RNA及蛋白的表达量与对照组无差异。3.与si-NC组相比,si-NPRA组细胞中β-Tubulin m RNA及蛋白表达水平均降低。小结:1.NPRA基因沉默可抑制MGC-803细胞中Akt/mTOR信号通路的磷酸化,从而抑制胃癌细胞的增殖和迁移。2.NPRA基因沉默可下调MGC-803细胞中细胞骨架微管蛋白β-Tubulin的表达进而抑制胃癌细胞MGC-803的增殖和迁移。结论1.NPRA基因沉默通过调控Akt/mTOR信号通路下调细胞骨架蛋白β-Tubulin的表达,进而抑制胃癌细胞MGC-803增殖、迁移。2.NPRA可作为治疗胃癌的潜在药物作用靶点。