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胰岛素样生长因子是一类多功能细胞增殖调控因子,可在多种组织器官合成,除发挥全身内分泌作用外,更为重要的是在组织器官局部以自分泌和(或)旁分泌的方式发挥生长促进作用。人类子宫存在着完整的IGF系统,不仅参与月经周期中子宫内膜的增生和分化,作为生长因子,还促进着床前胚胎发育,调节滋养细胞侵入蜕膜,促胎盘生长,促进胎儿生长发育。 但IGF系统在人类子宫局部的精确作用机理尚未清楚,部分表达尚有争议。IGF系统,特别是IGF-Ⅱ在正常早孕妇女绒毛、蜕膜蛋白水平上的表达,国外文献资料极少,国内尚未见报道。 本课题采用单克隆抗体SP免疫组化法测定了胰岛素样生长因子-Ⅱ、ER、PR在人早孕期绒毛、蜕膜中的表达,并用组织学积分法进行半定量分析和相关分析,目的在于探讨IGF-Ⅱ调节滋养细胞侵入蜕膜,促进胚胎生长发育的作用机理,从而为提高人类辅助生育技术的 硕十学位论文成功率提供理论依据。材料与方洁 选择 2000年 12月至 200年 1月年龄在 3 5岁以下,停经 40-60天,自愿来我院人工流产终止妊娠的妇女共30例作为研究对象。 标本采集:用一次性塑料软管负压吸出绒毛及蜕膜组织后,纱布擦干血迹,经液氮速冻后,立即放入-80 C超低温冰箱内储存备用。 检测方法:1*卜H行冰冻切片单克隆抗体SP兔疫组化染色;*R、PR行石蜡切片单克隆抗体SP免疫组化染色。 结果判定标准: 将SP染色切片置于CHK型号olympus显微镜400X下观察,在绒毛细胞滋养细胞,合体滋养细胞和蜕膜间质细胞密集区各选择5个视野,每个视野计数 100个同种细胞,分别读出其中阴性 -)、弱阳性 (+)、阳性卜+)和强阳性(+++)的细胞数。阴性卜):细胞浆(核)内无棕色颗粒出现;弱阳性(+):细胞浆(核)内有较浅的棕色颗粒;阳性(++):细胞浆(核)内棕色颗粒清晰;强阳性(++一 细胞浆 (核)内有明显棕色颗粒。 再用组织学积分H-score的方法进行半定量分析。 统计学分析: 采用 SPSSIO刀软件包:组织间表达行单因素方差分析,假设检验水准定为双侧,a—0刀5。二个变量间的相关分析,选择Pearson相关系数,假设检验水准定为双侧,a=0.05。结 果 1.IGF刁在正常早孕妇女绒毛、蜕膜中均有阳性表达,定位于 3 硕十学位论文细胞浆。 2.IGF刁在绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和蜕膜间质细胞的组织学积分分别为 303.47士28.59,348.50土20二2和 267.77士60.27。ER、PR在绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和蜕膜间质细胞的组织学积分分别为 181.43士147二0,157.70土130.72,255.33士68.38和 64.87士9二.65,吩.30士62.1乙13斗.37土51.27。 IGF 11在正常早孕妇女绒毛、蜕膜的表达阳性率为 100%,绒毛细胞滋养细胞和合体滋养细胞中的组织学积分显著高于蜕膜间质细胞(P<0.00)。 ER、PR在蜕膜间质细胞的组织学积分显著高于绒毛滋养细胞 o<0刀0N 3.正常早孕妇女蜕膜间质细胞中IGF-11。ER、PR表达的相关性分析 采用SPSS10刀软件包中二个变量间的Pearson相关分析。 ER、PR呈显著性正相关(Pearson相关系数为 0.624,P<0.01)。 1*卜11、PR无明显相关性Jearson相关系数为-0.347,P>O.05)。 1*}11。*R无明显相关性(Pearson十关系数为-0.134,P>0*5)。结 论1.胰岛素样生长因子I在正常早孕妇女绒毛。蜕膜中有阳性表达, 推测与调节滋养细胞侵入蜕膜,促进母体蜕膜和胚胎的生长发育 有关。2.正常早孕妇女蜕膜间质细胞中ER。PR呈显著性正相关。3.胰岛素样生长因于刁参与母体对胚胎着床的应答过程及影响胚胎 4 硕士学位论文 发育的关系有待于进一步研究。