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胶质瘤是颅内最常见的肿瘤,手术切除,结合术后放化疗仍然是胶质瘤的标准治疗方案。虽然化疗可以延缓疾病进展,但胶质瘤的预后仍然很差。其中,多形性胶质母细胞瘤患者的5年生存期最短,且中位生存时间仅为初诊后12至14个月,因为它是所有胶质瘤中最具侵袭性的。目前胶质瘤的研究热点是寻找新的有效治疗靶点及有价值的生物诊断标记物,以提高胶质瘤的诊断及治疗效果。长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是一组长度超过200个核苷酸的非蛋白质编码RNA,参与了多种生物学过程,可在表观遗传学、转录前及转录后等多个水平调控基因的表达。lnc RNA的异常表达可能在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用。肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(actin filament-associated protein 1-antisense RNA 1,AFAP1-AS1)是新发现的一种 lncRNA,在食管癌、鼻咽癌、肺癌、胰腺癌、结直肠癌等多种肿瘤中均表达上调。AFAP1-AS1的表达上调可作为预后的预测指标,并可促进肿瘤细胞的侵袭和迁移。然而,AFAP1-AS1在胶质瘤中的生物学特性及其在预后中的作用尚不完全清楚。本研究的主要目的是探讨lncRNA AFAP1-AS1在胶质瘤发生、发展和预后中的作用,为胶质瘤的靶向治疗提供一种新的治疗思路。本研究分为三个部分,主要研究方法和结果如下:第一部分长链非编码RNAAFAP1-AS1在人脑胶质瘤中的表达研究目的:研究AFAP1-AS1在脑胶质瘤组织及正常脑组织中的表达情况,结合临床病例资料,分析AFAP1-AS1的表达量与患者各临床指标之间的关系。方法:在5例正常脑组织和52例胶质瘤组织标本中,采用RT-PCR法检测AFAP1-AS1的表达量,并利用统计学方法分析AFAP1-AS1表达水平与患者各临床指标及预后的相关性。结果:AFAP1-AS1在高级别胶质瘤中的表达量显著高于其在低级别胶质瘤和正常脑组织中的表达量,差异具有统计学意义(P<0.01)。AFAP1-AS1在低级别胶质瘤组织中的表达量与正常脑组织中表达量无明显差异。临床病例资料统计分析结果显示AFAP1-AS1的表达水平与胶质瘤级别呈正相关和KPS评分呈负相关(P=0.035,P=0.001)。Kaplan-Meier生存分析显示,AFAP1-AS1的表达水平与患者总生存时间呈负相关(P<0.001)。结论:AFAP1-AS1的表达随着胶质瘤级别的升高而升高,并与患者的预后呈显著负相关,AFAP1-AS1是胶质瘤发生发展过程中的潜在致癌基因。第二部分 下调AFAP1-AS1的表达对胶质瘤细胞系生物学特性的影响目的:研究AFAP1-AS1对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用RT-PCR法检测AFAP1-AS1在胶质瘤细胞系和正常星形胶质细胞的表达水平。设计合成AFAP1-AS1 siRNA,将其转染至胶质瘤细胞系U87和U251中,采用RT-PCR检测干扰效率。在AFAP1-AS1 siRNA转染U87和U251胶质瘤细胞系24小时后采用一系列细胞功能实验检测AFAP1-AS1下调对胶质瘤细胞生物学特性的影响。结果:AFAP1-AS1在胶质瘤细胞系中的表达显著高于其在正常星形胶质细胞中的表达量。将AFAP1-AS1 siRNA转染U87和U251后,AFAP1-AS1表达量明显下降。MTT实验结果显示,敲减AFAP1-AS1后,U87和U251细胞的增殖能力明显下降;细胞周期实验结果提示,敲减AFAP1-AS1后能够引起U87和U251细胞发生S期阻滞;敲减AFAP1-AS1能够明显抑制U87和U251细胞的侵袭能力,引起侵袭相关蛋白发生变化。结论:沉默AFAP1-AS1可抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭。第三部分AFAP1-AS1靶基因的筛选及验证其在人脑胶质瘤中的表达研究目的:挑选AFAP1-AS1可能的靶基因,检测其在胶质瘤组织及细胞中的表达情况,探索AFAP1-AS1在胶质瘤中起促癌作用可能的分子机制。方法:将通过生物信息学分析寻找AFAP1-AS1可能的靶基因,并采用RT-PCR检测其在胶质瘤组织及细胞中的表达情况。在U87和U251细胞中敲减AFAP1-AS1后,观察AFAP1蛋白水平是否发生变化。结果:AFAP1-AS1与AFAP1在基因序列中位置相关。AFAP1在高级别胶质瘤中的表达量显著低于其在低级别胶质瘤及正常脑组织中的表达量。AFAP1在低级别胶质瘤组织中的表达量与正常脑组织中表达量无明显差异。AFAP1在胶质瘤细胞中的表达量显著低于正常星形胶质细胞中的表达量。在U87和U251细胞中下调AFAP1-AS1可以增加AFAP1的表达。结论:AFAP1的表达水平随着胶质瘤级别的升高而降低,AFAP1-AS1可能是通过调节AFAP1的表达水平而起促癌作用的。