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脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是交通、工矿事故及运动意外中常见的中枢神经系统(central nerve system,CNS)损伤性疾病,是人类致残率最高的疾患之一,这种损伤常导致截瘫,损伤平面以下运动和感觉功能丧失,给家庭和社会造成巨大的精神压力和经济负担。自20世纪后50年至21世纪,从修复脊髓损伤的实验研究及临床观察来看,损伤脊髓修复的关键是神经纤维在脊髓内能够长距离生长,并且生长的神经纤维能穿过损伤瘢痕到达远侧端,修复脊髓上、下行神经通路,从而获得感觉和运动功能的恢复。30多年前,在唐山发生了一次罕见的大地震,造成了几十万人的伤亡,在幸存的伤员中有相当一部分是脊髓损伤患者,失去了生活自理能力。2008年5月12日在汶川,又一次发生了骇人听闻的大地震,37万余伤员中因SCI造成截瘫者占2%。目前国内、外对于脊髓损伤的治疗还是以外科手术配合激素治疗为主。据资料统计显示,脊髓损伤患者一生的治疗与康复费用平均高达75万美元以上,美国每年对SCI患者的花费超过60多亿美元。因此,寻找一种更加经济、有效的治疗方法迫在眉睫。本研究通过中、西医相结合的方法,旨在探讨甲强龙(methylprednisolone,MP)、电针华佗夹脊穴与大鼠羊膜上皮细胞(amniotic epithelial cells,AECs)移植联合治疗对脊髓损伤大鼠功能恢复的作用。将90只成年雌性Wistar大鼠随机分成五组,每组18只。SCI对照组:采用改良的Allen s撞击法,做脊髓损伤模型,不进行治疗;甲强龙组:脊髓损伤后,用大剂量MP冲击治疗,立即静脉推注MP30mg/kg,4h后重复1次,30mg/kg,此后,静脉推注MP30mg/kg,2次/d,共3d;MP+华佗夹脊穴电针组:在MP治疗的基础上,脊髓损伤后4h,行华佗夹脊穴电针治疗。损伤平面上、下各2对取穴,左、右穴位交替使用,选用长25mm、直径0.35mm的毫针,上海产6805-II型治疗仪,设置为正、负极,疏密波,频率1～2Hz,强度0.3～1.0 mA,以针刺处肌肉轻微抖动为宜,持续15min,此后1次/d,6d为1疗程,间隔2d,进入下一个疗程,共治疗3个疗程;MP+电针+AECs移植组:在进行MP和华佗夹脊穴电针治疗的基础上,脊髓损伤后第7天,用微量注射器在SCI处中心灰质区移植AECs 5μl,浓度:1 107/μl;假手术组:只打开椎板,暴露脊髓,不造成脊髓损伤。各组术后30d行病理组织学观察和荧光红(fluorescein red,FR)逆行示踪;神经丝(neurofilament,NF)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)和胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光组织化学观察;神经电生理检测以及每6d行为学观察(BBB scores)。结果发现:MP+电针+AECs组脊髓损伤处GFAP的表达低于其他损伤组,可见大量的FR阳性神经纤维,通过脊髓损伤区,数量较其他损伤组明显增加,纤维走行较规则,几乎平行排列且红色荧光着色较强,并在对应的大脑皮质运动区和脊髓灰质后角见到红色FR阳性细胞;同时在SCI处可见大量Hoechst33342标记的阳性AECs(蓝色),生长良好,分布均匀。MP+电针+AECs组损伤区同时可见大量有序的NF、5-HT和CGRP阳性神经纤维,其中5-HT阳性纤维比例占假手术组5-HT阳性神经纤维的61.5%,明显高于CGRP阳性纤维占假手术组的7.6%。神经电生理检测显示MP+电针+AECs组与其他损伤组比较皮质体感诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)与运动诱发电位(moto evoked potential,MEP)的峰-峰值显著增加,潜伏期明显缩短,差异有统计学意义(P<0.01),其中MEP恢复程度优于SEP。综上所述,MP、电针华佗夹脊穴联合大鼠AECs移植治疗脊髓损伤能有效抑制星形胶质细胞的过度增生,恢复了神经传导通路,极大的促进了神经纤维的再生和大鼠后肢功能的恢复,且运动功能恢复优于感觉功能的恢复。此项研究创新性地应用甲强龙、电针华佗夹脊穴与羊膜上皮细胞移植联合治疗脊髓损伤,为SCI的综合治疗开辟了新思路,寻找到一种更为简便、有效的方法,同时也为临床治疗SCI提供了新的实验依据。