苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）在害虫生物防治中发挥了重要作用,是应用最为广泛的生防微生物之一,其杀虫毒素基因的研究和挖掘是进一步应用的基础。草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda.E.Smith)是一类重大的农业害虫,2019年初传入我国并迅速蔓延至多个省份,对我国的农业安全存在巨大威胁。本论文旨在从土壤样品中分离筛选Bt菌株,测定不同Bt菌株对草地贪夜蛾幼虫的毒力,对新发现的cry1Ac40基因进行克隆和原核表达的研究,得到的主要结论如下。本实验自260份土壤样品中分离得到的芽孢杆菌共273株,芽孢杆菌检出率48.66%,其中含苏云金芽孢杆菌40株,Bt指数为14.56%,检出Bt伴孢晶体形状包括菱形、球形、方形、椭圆形和不规则形。使用通用引物进行的PCR基因型分析结果表明,这 40 株 Bt 菌含有cry1、cry2、cry4/10、cry5、cry7、cry8、cry18、cry22、cry26-28、cry34-35、cry49和vip3A等21种基因型。cry1类基因含量最高,达到27.5%;其次为cry7类基因,其含量为22.5%。还有FN026、FN003、MC042等6株菌株未鉴定出基因型。生物活性测定结果表明Bt XPZ43和WFS18对草地贪夜蛾2龄幼虫的毒力最强,120h时校正死亡率为100%;其次为菌株LYH25、JLS1、JYS2和UK028,120h时校正死亡率分别为 97.25±4.17%、97.25±6.36%、97.25±2.41%和 95.71±4.17%。基因型分析表明对草地贪夜蛾具有高毒力株菌中cry1、cry9、cry11与chi36基因出现的频率最高,分别为84.61%、72.72%、72.72%、84.61%。同时,本论文中还发现15株Bt菌株对草地贪夜蛾幼虫有明显的生长抑制作用,Bt WFS-52、MB-3、MB-4、WFS-46、XPZ-4菌株在120h时对草地贪夜蛾2龄幼虫生长抑制率分别为86.13%、80.18%、75.70%、74.54%、72.69%。本论文测定了菌株UK028孢晶混合液对草地贪夜蛾2龄幼虫的LC50值为37.09 mg/mL,并从该菌株中克隆得到一新基因Bt cry1Ac40,该基因含有3534个碱基,编码由1178个氨基酸组成的蛋白质。通过BLAST软件比对分析发现,cry1Ac40与已登录的cry1Ac10基因（登录号:CAA05505）相似性最高,到达99.89%,存在404位置和1076位置两个氨基酸差异,该基因已提交GenBank（登陆号:MZ224024）并被国际Bt基因命名委员会正式命名为cry1Ac40。该基因在大肠杆菌BL21中能正确表达130kDa蛋白,其表达产物对草地贪夜蛾2龄幼虫具有较高毒力,LC50值为1μg/mL,通过该结果初步推断cry1Ac40基因编码蛋白发挥杀虫作用。