草坪土壤异养硝化细菌分离筛选及其对不同氮源的硝化能力研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:coolsun070279
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草坪是养分需求较高的人工植被,通常通过施入大量化肥来维持养分供给,这不仅提高了养护草坪的成本也会导致环境污染。异养硝化作用能够把土壤有机氮直接转化为植物可利用的亚硝态氮和硝态氮,有利于提高土壤供氮能力。由于异养硝化作用的特殊性,在土壤氮素转化中的调控作用备受关注,利用异养硝化微生物提高土壤养分供给能力成为治理农业化肥污染的重要研究课题。但由于研究积累少,异养硝化微生物种类及功能、硝化能力及产物、氮损失及气体排放等很多机制尚不清楚。本试验采用选择性培养基从草坪土壤中筛选并分离出两种异养硝化细菌,将菌种16S rDNA序列与GenBank进行同源性对比后确定其菌种。分别利用无机态氮(NH4+-N)、低分子量有机氮(甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸)及混合氮(氨基酸+铵态氮)为氮源,在恒温条件下进行异养硝化反应,测定菌种对不同氮源的硝化能力、中间产物及N2O排放特征,为揭示异养硝化菌对不同氮源的利用能力和硝化产物机制提供理论依据。结果如下:1.本试验筛选分离到的两种异养硝化细菌,既没有孢子也没有鞭毛,一种菌呈白色,另一种菌呈不透明的乳白色。SEM图像表明两菌种细胞呈现短杆,大小分别为(0.70.9)×0.5μm和(1.01.2)×0.5μm。都属于假单胞杆菌属(Pseudomonas sp),16S rDNA片段长度分别为1448 bp和1460 bp,分别命名为Pseudomonas sp.BJ和Pseudomonas sp.DJ,GenBank中的登录号分别为MF001078和MF001079。2.无机氮为氮源时,两个菌种具有很强的硝化能力,对铵态氮的利用率分别为96.86%和97.06%。硝化过程中,两个菌种都产生羟胺、亚硝酸盐和硝酸盐。DJ菌产生的羟胺及硝酸盐含量显著高于BJ菌种。3.三种氨基酸为氮源时,BJ菌种对谷氨酸的利用率最小(P<0.05),而DJ菌种对谷氨酸的利用率最大(P<0.05),DJ菌种对谷氨酸的利用率显著高于BJ菌种(P<0.05)。两个种菌对甘氨酸和赖氨酸的利用量没有明显的差异。在氨基酸+铵态氮为混合氮源时,BJ菌种对谷氨酸的利用率最大(P<0.05),对赖氨酸和甘氨酸的利用没有明显差异。DJ菌种对氨基酸的利用率为甘氨酸>赖氨酸>谷氨酸(P<0.05)。两种菌种在混合氮源中对铵态氮的利用率比在无机氮中低(P<0.05),BJ菌种对铵态氮的利用率高于DJ菌种。4.在无机氮的硝化过程中,BJ菌种的N2O总排放量显著高于DJ菌种(P<0.05)。在6 d的有机氮硝化过程中,DJ菌种在甘氨酸为氮源时产生的N2O含量最高(P<0.05)。BJ菌种在三种氨基酸及DJ菌种在赖氨酸和谷氨酸的培养基中产生的N2O排放量无显著差异。
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