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黄曲霉毒素B1广泛存在于粮食作物和饲料中，是迄今为止发现的最强的致癌物质之一，其毒性要远远高于氰化物、有机农药等，严重威胁了人类和动物的生命安全。目前黄曲霉毒素B1检测方法大多依靠液相色谱等昂贵的仪器来进行，不利于现场检测，而且需要专业的检测人员来操作仪器，花费时间久且检测费用高。因此，研究出适合现场检测且时间短、费用低的检测方法具有重要的意义。黄曲霉毒素B1属于小分子化学物，不能采用直接免疫动物的方法来获取多克隆抗体。抗原合成首先利用羧甲基羟胺半盐酸盐进行黄曲霉毒素B1的改造，使其在碳三位置连接上羧基。2mg AFB1于2mL吡啶甲醇（V/V1:3）溶液中直接在室温下进行反应，生成肟化物AFB1-O，利用薄层层析、紫外扫描和质谱进行AFB1-O的鉴定，得到其紫外吸收峰为209、220、264、360nm，AFB1的利用率为85.7%。AFB1-O在EDC或者DCC的作用下与牛血清白蛋白、鸡蛋清白蛋白进行偶联，得到免疫原AFB1-O-BSA和包被原AFB1-O-OVA。利用免疫原AFB1-O-BSA免疫小鼠，得到多抗血清，利用辛酸-硫酸铵盐析及透析法进行纯化，纯化后血清经过SDS-PAGE电泳显示为2条带。采用间接ELISA方法测定血清效价，6只小鼠的效价均在6000以上，其中3号小鼠的效价为10000以上，抗体浓度为1.37mg/mL，IC-ELISA标准曲线为y=-43.50x+99.37(R2=0.988)，IC50为12.59ng/mL。以柠檬酸钠还原氯金酸来制备胶体金。以反应时间、反应pH、转速进行50mL0.01%氯金酸中加入1%柠檬酸钠2mL进行正交实验，得出最优反应条件为不加入酸碱物质，转速为100r/min，沸腾后反应10min条件下制备出来的胶体金良好，电镜下观察粒子平均直径为14.6nm，紫外吸收峰为518.5nm。通过计算得到粒子浓度为6.8×1010个/cm3，摩尔浓度为1.13×10-10mol/L，每个胶体金粒子中含有9.64×105个金原子，其胶体金临界絮凝浓度为0.8g/mL。试纸条主要由样品垫、金标垫、NC膜和吸水纸等组成。利用目测法和光电比色法确定了最适抗体标记量和最适pH，稳定1mL胶体金最适抗体稳定量为55.2μg，1mL胶体金中加入12μL浓度为0.1mol/L碳酸钾时为最适pH。制备好的金标探针进行可见光扫描，其吸收峰为528.5nm。采用浸金法制备金标垫，检测线划上浓度为1mg/mLAFB1-O-OVA，质控线划上浓度为1.2mg/mL羊抗鼠二抗。组装试纸条后经过测定，得到组装后的试纸条的灵敏度为150ng/mL。