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板蓝根为十字花科菘蓝属植物菘蓝Isatis indigotica Fort的干燥根,性寒味苦,有清热解毒、凉血消肿的功效。板蓝根中含有丰富的有机酸类、生物碱类及多糖成分,这些成分各自发挥不同的药理活性,共同使板蓝根发挥抗内毒素、抗病毒、抗炎以及免疫调节的药理作用。【目的】建立板蓝根多糖(IIF)化学分离的工艺流程。考察板蓝根多糖对小鼠淋巴细胞分泌IL-10、INF-γ以及NK细胞活性的影响。【方法】提取工艺:以浸膏得率为指标,考察提取温度、煎煮时间和加水量对多糖提取效果的影响,确定多糖提取的最佳工艺条件。以脱色率为指标,设计3因素3水平的正交设计表,考察树脂类型、上样量、流速对多糖脱色效果的影响,选择适宜对板蓝根多糖进行脱色的树脂。脱色后的多糖溶液装入透析袋内透析,除去多糖溶液中的小分子物质。以多糖的损失率为指标,考察不同透析时间对多糖透析效果的影响。利用凝胶层析技术,分别采用两种不同型号和功能的凝胶纯化得到板蓝根多糖-IIF,并利用薄层层析技术和HPLC-ELSD系统检测IIF的纯度和分子量。(整个提取、纯化过程均采用硫酸-苯酚法跟踪检测多糖的含量)活性研究:采用酶联免疫吸附试验(Elisa)考察板蓝根多糖对小鼠淋巴细胞分泌IL-10和IFN-γ数量的影响,同时利用乳酸脱氢酶释放法测定IIF对小鼠NK细胞活性的影响。【结果】经过初提、脱色、超滤、纯化4步工序得到的板蓝根多糖纯度为93%;分子量为65×10~4;其体外活性试验研究表明,板蓝根多糖能明显提高小鼠淋巴细胞分泌IL-10的量;增强小鼠NK细胞活性;对小鼠淋巴细胞分泌IFN-γ的量无明显影响【结论】板蓝根多糖的薄层层析和HPLC证明其为一类纯度较高、分子量较大的糖类物质,可能是一种多糖与肽类结合的板蓝根糖肽。其体外活性试验研究表明,板蓝根多糖能显著提高小鼠T细胞分泌TH2型细胞因子产生体液免疫应答,增强NK细胞的杀伤活性,从而增强小鼠的免疫功能,揭示多糖可能是板蓝根发挥清热解毒功效的物质基础之一。