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本实验以西兰苔叶黄酮的提取和分离纯化为目的,运用乙醇超声法为提取手段,实现黄酮类化合物最大化利用。借助HPLC、LC-ESI-MS、GC-MS等现代仪器对粗提物进行分析和结构鉴定,将黄酮粗提物以及纯化物进行抗癌活性研究。1.采用乙醇超声波提取方法,考察提取温度、乙醇浓度、料液比因素对西兰苔叶黄酮的提取率的影响。通过响应面设计确定最佳工艺条件:提取温度60℃、浓度70%、料液比1:27。黄酮得率为11.96mg/g。2.运用HPLC、LC-ESI-MS、GC-MS等分析手段,对西兰苔叶黄酮粗提物成分进行分析,GC-MS结果显示西兰苔叶含有丰富的挥发油成分,其中富含脂肪酸(棕榈酸和硬脂酸)。以LC-MS为检测方法,初步鉴定出粗提物中含有四种黄酮类物质。分别是槲皮素、芦丁、芹菜素、山奈酚。3.粗提物通过乙酸乙酯、正丁醇萃取后,经过聚酰胺树脂分离出三种物质,乙酸乙酯层经50%乙醇洗脱出的溶液含有槲皮素,含量为85.4%。正丁醇层分别用50%、70%乙醇洗脱,50%乙醇洗脱出的溶液含有山奈酚,含量为78.5%,经70%乙醇洗脱出的溶液是山奈酚和芹菜素,含量为82.6%。4.通过MTT实验检测EOF(黄酮粗提物)和纯化物对细胞生长抑制率,Annexi-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,来探讨西兰苔叶黄酮对癌细胞增殖抑制作用以及凋亡机制。结果显示,EOF对结肠癌SW480细胞、肝癌HepG2细胞、宫颈癌Hela细胞、肺癌A549细胞这几种细胞株均表现出抑制作用,抑制率随药物浓度的增加而增大,呈明显的量效关系,其IC50值分别为88.14、99.65、104.43、79.77μg/mL。对SW480细胞的作用最为明显。以SW480为受试细胞株,比较EOF、SFB1(粗黄酮分离产物1)、SFB2(粗黄酮分离产物2)、SFB3(粗黄酮分离产物3)、Que(槲皮素)对SW480抑制作用强弱,结果表明这几种物质表现出不同程度的抑制作用,IC50分别为88.14μg/mL、65.06μg/mL、72.62μg/mL、79.42μg/mL、54.64μg/mL。通过流式细胞仪得出SW480细胞的凋亡率分别为12.74%、16.41 %、19.61%、28.28%、50.66%。实验结果表明EOF是通过抑制增殖和诱导细胞凋亡来发挥对肿瘤的治疗作用。