沙门菌是典型的革兰氏阴性菌。沙门菌是研究病原体预宿主间相互作用的最佳例子之一。沙门菌依赖于其侵入宿主细胞并在细胞内复制的能力引起疾病的发生。病原体和宿主之间的“战争”是几个世纪以来在微生物致病领域中最令人难以置信的故事之一。感染的结果是达到一种平衡状态,即细菌在体内生存的环境与细菌通过调控基因的表达维持其生长特性的平衡。揭示病原体在宿主体内成功定植和生存的机制具有重要的意义。沙门菌可引起食物中毒,胃肠炎症,伤寒等症状,这主要取决于沙门菌的血清型和宿主的遗传特性。当细菌通过肠道黏膜后,可感染巨噬细胞,通过血液循环到达肝脏和脾脏,并在此生存与繁殖。沙门菌在宿主体内持续生存的能力,同时与机体复杂的抗细菌免疫系统对抗,主要依赖于一种称为沙门氏菌致病性群岛（SPIs）的毒力相关基因簇。沙门菌侵入靶细胞方式和在胞内持续生存的策略根据细胞类型的不同而变化,并取决于沙门菌特定基因的表达。沙门菌侵入细胞后,定居在被称为含沙门菌的囊泡（SCV）,一种经修饰的吞噬体,在其中存活和复制。沙门菌入侵细胞和SCV的形成依赖于两套Ⅲ型分泌系统T3SS1和T3SS2,将效应蛋白注入宿主细胞。很明显,SCV的形成是一个动态变化过程,涉及细胞内骨架重排,如细胞的重组、膜重塑,与内吞小体之间的联系,肌动蛋白重排和微管的运动和延伸。沙门菌致病机制的研究主要集中于鼠伤寒沙门菌,而对肠炎沙门菌致病机制的研究相对较少,肠炎沙门菌与宿主之间的相互作用和免疫应答研究仍处于不断的探究中。本研究旨在研究SPI2中效应蛋白SspH2的特性,探讨该基因在宿主免疫应答中的作用及其对肠炎沙门菌毒力的影响。为了更好地了解SspH2的致病机理,我们成功地构建了肠炎沙门菌C50336菌株的sspH2基因的突变株C50336-sspH2-和回复株C50336-sspH2+。在下面的部分中,我们将概述研究结果,以检测（i）sspH2基因的特征（ii.）SspH2效应蛋白在细菌胞内存活中的作用,（iii）诱导宿主免疫应答。1.肠炎沙门菌sspH2突变株的构建和生物学特性研究我们利用λ-red突变技术构建了肠炎沙门菌C50336sspH2基因（2.367 kb）的缺失突变体,并利用pBR322载体构建了相应的回补株。对C50336-sspH2-、C50336-sspH2+及其亲本C50336-WT的生长速率、LD50和毒力等生物学特性进行了评价。生长速率与所有菌株一致。小鼠的半数致死剂量测定显示,C50336-sspH2-的LD50比其他两株高30倍。为了更好地了解sspH2基因在细胞感染模型中沙门菌生存和复制的作用,细菌感染Caco2-BBE细胞系的结果表明,与野生株和回复株感染组相比,突变株感染组中胞内菌的复制能力低,感染8h后达到最高峰记录高峰值,在24h时野生株和回复株仍然表现出高于突变株的复制能力。表明SspH2效应蛋白的沙门菌胞内生存和增殖过程中发挥重要作用,并且在后期SCV成熟过程中发挥效应。我们利用体内实验来评价SspH2效应蛋白对肠炎沙门菌C50036致病力的影响。将108 CFU的细菌感染C57BL/6小鼠后计算组织器官里的细菌数,并对组织的病理学变化评分。定植结果显示突变株在组织器官内的定植能力要显著低于其它组,病理学特征显示SspH2增强了细菌的毒力,突变株感染组毒力减弱。2.SspH2基因在宿主免疫中的作用我们利用qRT-PCR技术研究SspH2在诱导宿主免疫应答中的表达作用。提取细菌体外感染Caco-2细胞和体内感染组织的RNA用于qRT-PCR技术,结果清楚地表明,暴露的绒毛样Caco-2细胞和组织的C57BL/6小鼠感染的肠炎C50336突变株IL Iβ,INF γ,IL-12b和iNOS细胞因子则高于野生株和回复株感染组,IL-8表达降低,表明SspH2可能是抑炎效应蛋白。主要结论这些研究有助于理解SspH2效应蛋白对细菌的致病力和免疫应答效应的影响,并且为揭示SspH2的功能提供了新观点。根据目前的数据,我们可以得出结论（1）LD50的结果表明,SspH2缺失导致肠炎沙门菌毒力的降低（30倍）;（2）细胞因子检测结果显示SspH2是肠炎沙门菌的主要抑炎效应蛋白;（3）SspH2是肠炎沙门菌的毒力基因,能增强细菌的致病力。（4）SspH2提高了肠炎沙门菌在小鼠体内组织器官内的定植。（5）sspH2是一个“幽灵基因”,它掩盖了沙门菌的数量,通过下调前炎性细胞因子的表达来发挥抑炎效应。