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枯草芽孢杆菌NCD-2是从根际土壤中分离筛选到的一株对棉花黄萎病病原菌Verticillium dahilae Kleb具有较强抑制作用的菌株,并对棉花黄萎病表现出较理想的防治效果。通过对NCD-2菌株培养条件(培养基、培养温度、培养时间和pH值)的研究,得到了抗菌物质产生的最佳条件为:在NB液体培养基中、30℃、pH=7、摇床培养(180rpm)2 d,所得发酵液对棉花黄萎病菌的抑制作用最强。通过对最佳条件下获得的NCD-2菌株培养液进行硫酸铵沉淀(30%～80%),并用14000D透析袋透析获得对棉花黄萎菌有抑制作用的蛋白粗提液。通过RNA酶,蛋白酶K和胰蛋白酶分别对该蛋白粗提液处理发现,经RNA酶处理后蛋白液的抑菌活性与对照相比差异不显著,经蛋白酶K和胰蛋白酶处理后蛋白粗提液的抑菌活性与对照相比显著降低;蛋白粗提液经热(60℃、80℃、100℃、120℃)处理30 min,结果表明经60℃处理后的抑菌活性与对照相比差异不显著,经80℃、100℃、120℃处理后抑菌活性与对照相比显著下降,但经120℃处理30 min后仍有一部分抑菌活性。因此初步说明抑菌菌物质含有不耐热蛋白类物质。本文对30%~80%饱和硫酸铵沉淀的蛋白粗提掖进行了进一步的研究,以确定抑菌物质的成分,即30%～80%硫酸铵沉淀的蛋白粗提液经DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析得到3个组分,其中第二组分有抑菌活性,该组分通过Sephacry S-100凝胶过滤分离得到3个组分S-1、S-2和S-3,其中S-1和S-3两个组分经活性检测为抑菌组分,经RPC分析已达到分离纯。本文对小分子的脂肽类抑菌物质也进行了简单的分析,以确定小分子脂肽类抑菌物质的成分,即浓盐酸沉淀的脂肽类抗生素粗提液与标准品Surfactin、ItufinA进行HPLC比较分析,结果表明NCD-2菌株的抑菌活性物质由多种成分构成,其中含有与IturinA相似的成分,进一步采用了ESI-MS对NCD-2菌株胞外抑菌物质粗提液与标准品Surfactin、IturinA进一步比较分析,发现NCD-2菌株的抑菌活性物质中含有分子量与标准品ItufinA相同的3种同系物。