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目的:结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是目前世界范围内最常见的消化道恶性肿瘤之一,早期诊断率较低,目前治疗方案以手术切除为主,结合放化疗或者中医药综合治疗。虽然目前治疗手段较之前有较大进步,但CRC临床预后仍不理想。因此,深入探讨结直肠癌潜在的发病机制,寻找新型诊断标记物以及治疗靶点,为结直肠癌临床诊断和治疗提供新的方向。最新研究发现,c-Myb是参与各种生物学功能的关键转录因子,在多种人类肿瘤中发挥关键作用,但其在CRC中的作用机制仍未得到充分研究。本研究拟通过体内体外实验发现c-Myb通过调控c-fos影响结直肠癌细胞增殖、凋亡、转移和侵袭。方法:使用RT-PCR和WB检测20对CRC患者c-Myb表达水平,用免疫组织化学染色检测c-Myb在132例CRC患者(Ⅱ期和Ⅲ期)的癌组织和癌旁组织中的表达,使用半定量评分作出ROC曲线。卡方分析c-Myb表达水平和临床病理参数的相关性。使用Kaplan Meier生存模型分析c-Myb表达水平对CRC预后的影响。用RT-PCR检测五种常用的CRC细胞系(HCT116,SW620,HT29,LOVO和SW480)和一种正常肠上皮细胞(HIEC-6)中的c-Myb表达水平。选取两种c-Myb表达水平较高的CRC细胞系,使用成簇的规律间隔性短回文序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated9,CRISPR/Cas9)系统对c-Myb基因进行敲除(Knockout,KO),通过体内体外细胞功能实验评估c-Myb KO对CRC细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、克隆形成以及体内成瘤能力的影响。通过转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)分析c-Myb在CRC进展中的潜在致癌通路,使用Cytoscap软件预测c-Myb分析潜在通路可能的靶基因。并使用染色质免疫共沉淀技术(Chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)进一步验证。通过Rescue挽救实验,在c-Myb KO的CRC细胞中过表达下游靶基因,从细胞增增、凋亡、迁移和侵袭等方面检测过表达下游基因后对细胞功能的影响,同时用WB实验研究过表达下游靶基因后对EMT信号通路的影响,从而进一步阐明c-Myb在CRC发生发展和转移中的作用机制。结果:c-Myb在20例患者的肠癌组织的表达水平明显高于癌旁组织,c-Myb在132例CRC患者染色评分显示ROC曲线的截至值为3.5,确定CRC组织样本分为高表达组(n=71)和低表达组(n=61)。c-Myb在CRC组织中的表达水平与患者远处淋巴结转移显著相关(P<0.001)。在CRC中,c-Myb高表达患者总体生存率(Overall Survival,OS)以及无病生存率(Disease-free Survival,DFS)明显降低,c-Myb表达水平是CRC患者术后OS和DFS独立预后因子。通过亚组分析,c-Myb表达水平分别在Ⅱ期和Ⅲ期CRC患者中,同样具有显著的临床预后意义,可以作为Ⅱ期和Ⅲ期CRC患者术后OS和DFS的独立预后影响因子。c-Myb在HCT116和SW620两种细胞系中表达水平较高,在这两种细胞系中发现,c-Myb KO抑制CRC细胞的增殖、抗凋亡、侵袭、转移、克隆形成和体内肿瘤成瘤能力。RNA-seq测序以及Cytoscap软件分析表明c-Myb可能通过调节c-fos促进CRC发生发展。ChIP进一步验证c-Myb与c-fos靠近转录起始位点(Transcription Start Sites,TSS)区的启动子区相结合。挽救实验表明,c-fos过表达可以部分抵消c-Myb KO对CRC细胞增殖、抗凋亡、迁移、侵袭、克隆形成的抑制作用。WB实验发现c-Myb KO细胞中过表达c-fos,显著降低c-Myb KO对上皮间质转化(Epithelialmesenchymaltransition,EMT)通路中代表性分子标记物(E钙粘蛋白(E-cadherin),N钙粘蛋白(N-cadherin),Snail蛋白和波形蛋白(Vimentin))的抑制作用。结论:c-Myb表达水平是CRC患者术后OS和DFS的独立预后影响因子,c-Myb可作为临床潜在的诊断性生物标志物和治疗靶点。c-Myb靶向c-fos促进CRC细胞的增殖、抗凋亡、迁移、侵袭、克隆形成以及体内成瘤能力,并调控EMT通路。