目的：建立一种简便、快速、精确的甲基化定量芯片,检测CD11a (ITGAL)和CD70 (TNFSF7)基因启动子区甲基化水平。方法：1.亚硫酸氢钠基因组测序：DNA的亚硫酸氢钠处理,然后,巢式PCR扩增目的基因并纯化回收,最后进行克隆并测序。2.DNA芯片的制备：包括探针的设计、点样及固定。3.标准曲线的建立：将甲基化阳性与阴性标准品的PCR产物按不同比例(1：0,0.75：0.25,0.5：0.5,0.25：0.75,0：1)混合,与已制备好的芯片杂交,定量荧光强度。甲基化探针荧光强度为M,非甲基化探针荧光强度为U。以M/(M+U)为纵坐标,甲基化阳性产物在总产物中的百分比为横坐标。每组探针分别对应5个散点,进行一元线性回归分析,得到一条呈线性关系的荧光强度标准曲线。4.芯片方法的验证：每个基因选取一个病人和一个健康对照者同时用芯片和亚硫酸氢钠基因组测序的方法计算其甲基化水平来验证芯片的效度。5.芯片方法在临床样本检测中的应用：收集20例SLE患者及20例健康对照者的外周血(在知情同意的前提下),提取PBMC,并用磁珠分选出CD4+T细胞,提取DNA,经亚硫酸氢钠转化处理后,进行目的基因PCR扩增,与所制备的芯片进行杂交,扫描,计算其甲基化水平。结果：1.芯片荧光强度和甲基化水平呈线性相关。CD70：y=0.925x+0.017(R2=0.9912);CD11a：y=0.933x-0.014(R2=0.9832)。2.同一样本的芯片结果与甲基化检测的金标准亚硫酸氢钠测序结果相似。甲基化芯片：SLE及健康对照者CD11a、CD70基因启动子区甲基化水平(CD11a：0.3028(SLE)；0.6172(Control);CD70:0.2847(SLE); 0.6718(Control))亚硫酸氢钠测序(CD11a:0.2857(SLE);0.5750(Control); CD70:0.2955(SLE); 0.6212(Control))。3.20例SLE患者与20例健康对照者的甲基化芯片检测结果显示,与健康对照者比较,SLE患者CD4+T细胞CD11a、CD70基因启动子区甲基化水平明显低下,其差异具有显著性(p<0.05)。结论：成功建立了CD70,CD11a基因启动子区5个CpG位点的甲基化定量检测芯片。为SLE的病情判断及预后评估提供一种新的简便、快速、精确的检测工具。