第一部分通过阻滞FGFR信号通路逆转三阴性乳腺癌中T细胞排除现象的分子机制研究目的:研究肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)促进三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)产生T淋巴细胞排除的分子机制,探索成纤维细胞生长因子受体抑制剂(fibroblast growth factor receptor inhibitor,FGFRi)联合抗PD-1(programmed death receptor-1)单克隆抗体治疗小鼠TNBC的疗效。方法:运用生物信息学的方法将免疫排除型和炎症型TNBC的基因表达水平进行对比。通过小鼠体内实验研究FGFRi单药对肿瘤生长及肿瘤免疫微环境(tumor immune microenvironment,TIME)的影响。体外进行CFSE染色、细胞迁移实验和(interferon gamma,IFN-γ)分泌等实验探究FGFRi对T淋巴细胞的直接作用。在体外进行CCK8(cell counting kit 8)、诱导分化、RT-q PCR(real-time quantitative PCR)和细胞迁移等实验,探究FGFRi对CAFs的直接作用。构建T淋巴细胞与CAFs共培养体系,研究FGFRi通过作用于CAFs从而间接对T淋巴细胞迁移产生影响。运用Western blot(WB)检测下游信号通路的改变。将FGFRi联合抗PD-1单克隆抗体治疗小鼠TNBC,并用流式细胞术和高通量测序来检测TIME的变化。结果:生物信息学分析结果显示,与排除型TNBC相比,有6条FGFR相关的信号通路在免疫排除型的TNBC中显著上调。与对照组相比,FGFRi治疗组小鼠TNBC肿瘤生长速度显著减慢,且肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)中浸润的T淋巴细胞显著增加。然而,体外结果显示,与对照组相比,FGFRi处理组T淋巴细胞的增殖、迁移和IFN-γ分泌功能没有显著改变。但用FGFRi在体外处理成纤维细胞时,实验结果表明FGFRi可以显著抑制成纤维细胞的增殖、分化、迁移和分泌功能。并且在T细胞与CAFs细胞共培养实验中,发现FGFRi组发生迁移的T淋巴细胞数量显著增加。此外,WB结果显示,FGFRi使小鼠胚胎成纤维细胞系NIH/3T3中p-MEK 1/2的表达水平明显下调,但p-AKT的表达水平没有明显改变。在体内,与对照组和单药组相比,FGFRi与抗PD-1单克隆抗体联合用药组小鼠TNBC肿瘤的生长受到了显著抑制,并且TIME中的CD8~+T淋巴细胞和CD4~+T淋巴细胞比例显著增加,而肿瘤相关巨噬细胞(tumour-associated macrophages,TAMs)和骨髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)的比例显著减少,并且CD8~+T淋巴细胞分泌的IFN-γ增加,但调节性T淋巴细胞(regulatory T lymphocytes,Tregs)的比例变化无统计学差异。结论:FGFRi通过抑制成纤维细胞的功能促进T淋巴细胞的运动功能,与抗PD-1单克隆抗体联用时,改善TIME并显著抑制小鼠TNBC肿瘤的生长,为联合免疫治疗提供新的策略。第二部分Circ-1073抑制乳腺癌细胞恶性生物学行为的分子机制研究目的:研究circ RNAs 0001073(circ-1073)与乳腺癌临床病理学特性的相关性,并研究其在乳腺癌中发挥的抑癌作用,从而探究circ-1073用于治疗乳腺癌的可能性。方法:运用RT-q PCR在乳腺癌细胞系(breast cancer cell lines,BCCs)、正常乳腺上皮细胞MCF-10A、乳腺癌组织和肿瘤周围组织中对circ-1073的m RNA表达水平进行定量分析。通过卡方检验对circ-1073的表达水平与乳腺癌患者临床病理特征之间的相关性进行分析。用Kaplan-Meier方法进行无复发生存期(relapse-free survival,RFS)的评估,用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)用于评价circ-1073对乳腺癌的临床诊断价值。利用CCK8、克隆形成实验、流式细胞术、Wound-healing和异种移植瘤模型评价circ-1073在乳腺癌中发挥的生物学功能。结果:RT-q PCR结果显示,BCCs和乳腺癌组织中的circ-1073表达水平分别显著低于正常乳腺上皮细胞系和肿瘤周围组织的circ-1073表达水平。与circ-1073高表达组相比,低表达组患者的肿瘤体积更大,腋窝淋巴结转移阳性率更高,TNM分期更高,以及RFS更短。在体外实验中,与空载体组相比,过表达circ-1073组BCCs的增殖速率显著降低,凋亡比例显著增加,且使Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9的蛋白表达水平显著上调。在体内实验中,向移植瘤模型的肿瘤内中注射带有circ-1073过表达质粒或circ-1073质粒与纳米颗粒混合物均显著抑制了肿瘤的生长。结论:乳腺癌组织中下调的circ-1073与乳腺癌的不良预后显著相关,circ-1073在BCCs和移植瘤模型中起着显著的抑癌作用,表明circ-1073可能为乳腺癌提供新的治疗策略。