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目的:为了寻找帕金森病(parkinson disease,PD)临床早期的诊断指标,建立帕金森病临床前期中老年小鼠模型。检测小鼠的行为学、血生化、病理形态学、影像学以及超微结构病理学的改变。寻找符合帕金森氏病(PD)病理改变,具有较高诊断效率的生物标记物。 方法:72周健康C57BL/6j中老年雄性小鼠30只,体重30g,分为模型组和对照组。空白对照组:5只腹腔注射等量生理盐水。模型组:腹腔注射1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶,1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tet-rahydrophridine,MPTP,20mg/kg;模型组随机分为五组,每组5只。每周给药2次,给药时间为1周,2周,3周,4周,5周。模型组在注射药物后一周通过行为学进行检测。每组停药后第1周取小鼠血液并经心灌注制作小鼠脑部标本。提取小鼠血浆,采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测血生化指标:8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)和尿酸(UA)的变化数值。形态学主要采用通过酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组织化学方法观察小鼠多巴胺神经元,根据酪氨酸羟化酶阳性细胞计(Count of positive cell,CPC)判断多巴胺神经元丢失情况。透射电镜下,观察小鼠中脑纹状体以及黑质内超微结构的病理改变。影像学中3.0T核磁共振检测观察小鼠大脑面积,纹状体面积,黑质长度变化。 结果:空白对照组与模型组相对比:(1)行为学检测小鼠肢体运动协调能力,空白对照组未发现小鼠行为学异常,模型组第3周观察发现中老年小鼠的肢体运动协调能力下降,行为学检测统计结果显示模型组从第3周开始与空白对照组有差异性(P<0.05)。(2)血液生化指标检测,模型组的8-OHdG与UA的测量数值随着给药次数增加发生了变化,模型组第3周开始与对照组8-OhdG数值有增高,模型组第3周与空白对照组UA数值有降低,模型组与对照组有差异性(P<0.05)。(3)病理形态学检测,免疫组化TH,空白对照组小鼠黑质致密带(SNC)区域的TH阳性神经元成带状分布,数量正常;模型组TH阳性神经元细胞分布不规则,数量减少。模型组第3周TH阳性神经元数量与空白对照组TH阳性神经元数量存在差异(P<0.05)。(4)小鼠中脑黑质超微病理改变:对照组小鼠黑质神经元细胞的细胞器,内质网,线粒体以及高尔基体结构正常;模型组给药后第3周小鼠黑质神经元细胞粗面内质网扩张,数量明显减少,细胞收缩,质膜泡形成,线粒体肿胀,细胞空泡化及坏死脱落,随着给药剂量,次数的增加神经元变性加重。(5)影像学改变,空白对照组小鼠大脑面积,纹状体面积,黑质长度都正常;模型组随着给药次数,数量的增多,模型组给药后第3周开始出现大脑面积,纹状体面积明显减小,黑质的长度缩短。 结论:动物行为学,血液生物化学,超微病理学,形态学,影像学都在模型组给药后第3周开始出现原发性帕金森的症状。