研究背景:上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,在世界范围内其病死率居妇科肿瘤之首^[1]。紫杉醇联合铂类化疗方案是卵巢癌患者初次肿瘤细胞减灭术后的首选化疗方案^[2]。虽然近期完全缓解率已达80%以上,但大部分患者因复发而经历多次化疗,形成铂类耐受,因此化疗药物耐受已成为晚期卵巢癌患者治疗失败而死亡的主要原因之一^[3]。糖类抗原125（carbohydrate antigen 125,CA125）是目前世界上应用最广泛的卵巢上皮性肿瘤标志物,相关研究证实CA125可作为卵巢癌临床诊断,卵巢癌疗效评估及有无复发情况的敏感指标,其敏感性较高但特异性较差^[4]。因此迫切需要新的生物标志物预测EOC治疗效果。外泌体（exosome）为直径40～160 nm的微泡^[5],可由多种不同类型的细胞分泌,包括免疫细胞、肥大细胞和多种肿瘤细胞等,且普遍存在于包括血清、腹水、脑脊液、尿液等在内的多种生物体液中^[6]。外泌体富含脂质、蛋白质、RNA和DNA,这些物质源于原始细胞,但表达水平可能与其来源细胞有所不同,表明外泌体在不同状态下可能具有不同的功能^[7]。外泌体通过与细胞膜融合将内容物释放到细胞外环境中,介导相邻或远处细胞之间的信号转导^[8-9]。外泌体具有非常广泛的生物学效应,在许多生理病理过程中发挥重要的作用,如免疫中抗原呈递、肿瘤生长与迁移、组织损伤的修复等。许多研究表明,外泌体与多种癌症中肿瘤细胞与肿瘤微环境中的细胞间耐药的传递过程密切相关,其中也包括卵巢癌^[10]。由于外泌体的复杂组成,目前尚未阐明与化疗抗性相关的分子机制。但是,基于外泌体的生物标志物可能比常规标志物更加敏感,更具有特异性,而且是非侵入性的。迄今为止,尚未报道通过功能测定可将血清来源的外泌体用作EOC生物标志物。本课题以体外实验研究血清外泌体状况与顺铂敏感性及疗效的关系,确定EOC患者的血清外泌体是否可以预测患者对以铂为基础的化疗的反应。研究方法:1.超速离心法分离EOC患者血清及细胞培养基中的外泌体,使用透射电子显微镜（transmission electronic Microscopy TEM）,动态光散射（dynamic light scattering DLS）,蛋白印记法（Western blot WB）鉴定外泌体。2.MTT法检测顺铂对卵巢癌细胞株的24h时半数抑制浓度（IC50）,检测出对顺铂敏感细胞及耐药细胞。MTT法检测出含顺铂A2780与细胞外泌体共培养条件下的促增殖作用。MTT法检测A2780细胞在EOC患者血清外泌体与顺铂共培养条件下的促增殖作用。3.Caspase 3/7活性凋亡检测A2780细胞在细胞外泌体与顺铂共培养条件下的抑制凋亡作用。4.根据训练化疗半年后的预后信息,外泌体功能指数,CA125值,HE4值绘制ROC曲线确定最佳分组值,然后在验证组中检验这个分组值的敏感性和特异性。随访新诊断EOC患者及复发EOC患者化疗半年后,1年后的预后信息。5.统计学方法:测量数据的数据用x±s表示。通过方差分析组之间的比较。t检验用于两组之间的比较。对数秩检验用于生存分析。最佳截止点由ROC曲线确定。P<0.05被认为具有统计学意义。研究结果:1.EOC血清及EOC细胞培养基中分离出外泌体,TEM及DLS可以确认其具有双层膜,直径在40至160nm之间,呈圆形或椭圆形。此外,外泌体具有丰富的常见标记CD63,TSG101。2.使用基于A2780细胞的细胞模型,表明了来自顺铂耐药细胞的外泌体显著增加了A2780细胞对顺铂的耐受性。3.通过由术前的外泌体功能指数绘制的ROC曲线确定的截止值（功能指数=1.277）,42例新诊断的EOC患者分为低风险组和高风险组。低风险组（0/22）化疗后6个月未见复发,但高风险组20例中有8例复发。这些结果在另外30位患者中得到了验证:低风险组（0/17）无复发,高风险组61.54%的复发率（8/13）。4.通过13名化疗后的EOC患者外泌体功能指数,在6个月内,低风险组（0/7）未见复发,但高风险组6例中有4例复发。此外,外泌体功能指数有效地监控复发EOC患者疾病的进展（低风险组:0/5,高风险组:4/5）。在复发或进展的患者中,其中一些患者的血清CA125水平正常。结论:术前外周血中的外泌体可以预测EOC患者预后,化疗后的外周血中的外泌体也可以评估EOC患者化疗疗效,并且监测复发的EOC患者疾病进展。外周血中的外泌体可能是一种无创,有前途和有价值的预后生物标志物。