【摘 要】
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目的：观察miR-146a和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在脂多糖(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞中的动态表达,分析两者在时间上的变化关系,探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用及其
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目的：观察miR-146a和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在脂多糖(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞中的动态表达,分析两者在时间上的变化关系,探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用及其机制。方法：将体外培养的NR8383肺泡巨噬细胞按1×106个/mL接种于六孔板,贴壁90min后加入1μg/mL的LPS,刺激0h、3h、6h、12h后离心收集培养上清液和细胞团块。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测细胞中miR-146a和TNF-αmRNA的表达情况,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养上清液中TNF-α蛋白水平的表达。miR-146a和TNF-αmRNA的相关性采用双变量Pearson相关性分析。结果：1.LPS刺激6h后,细胞中的miR-146a表达水平开始增高(5.33±0.81倍,P<0.01),并且持续增高(12h：8.21±1.19倍,P<0.01)；2.LPS刺激3h后,细胞中TNF-a mRNA的表达即达到顶峰(67.48±24.52倍,P<0.01),6h后开始降低(29.53±4.26倍,P<0.05)；3.培养上清液中的TNF-α蛋白在LPS刺激3h后即升高(359.80±57.54pg/mL,P<0.01),于12h达高峰(729.22±50.40pg/mL,P<0.01)；4.细胞中miR-146a的表达水平与TNF-αmRNA的含量呈负相关(r=-0.895,P<0.01)。结论：LPS刺激0-12h后,miR-146a和TNF-α的表达呈现一定的动态变化,且细胞中miR-146a的表达水平与TNF-αmRNA的含量呈负相关,推测miR-146a可能参与了肺泡巨噬细胞的炎症反应调控。
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