黄曲霉毒素B1(AFB!)是黄曲霉毒素中毒性最强的一种,可严重损伤肝脏组织,甚至会引起癌变。N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)作为一种强抗氧化性的物质,具有对肝脏疾病治疗方面的优势。本试验以犬原代肝细胞为模型,研究AFB1对肝细胞的毒性作用以及NAC的保护效应。体外培养犬的原代肝细胞至对数生长期,随机分为 0、0.05、0.25、1.25、6.25、31.25 μg/mLAFB1 和 6.25 μg/mLAFB1+64 mmol/L NAC七个组,对犬的原代肝细胞处理36 h,观察细胞形态学及超微结构变化,检测犬肝功能相关指标,研究AFB1对肝细胞氧化和抗氧化能力的影响,检测细胞相关凋亡基因mRNA的表达量,选择空白对照组、6.25 μg/mL AFB1和6.25 ug/mL AFB1+64 mmol/L NAC三个组,研究NAC对AFB1肝细胞毒性的保护性。试验结果显示:1.AFB1对细胞活性具有抑制作用,处理36 h的肝细胞随着毒素浓度的增加,呈浓度依赖性,并作为后续试验条件。不同浓度的NAC处理后,当NAC的浓度达到64 mmol/L时,对细胞的保护作用效果最显著。2.倒置显微镜下观察可见,培养36 h后对照组肝细胞形态大小不一,但细胞间隙紧密相接,生长状态良好;经过AFB1处理的肝细胞随毒素浓度的增加,细胞数量明显减少,细胞间隙增大,散在分布裂解的细胞残骸;电镜下观察,对照组细胞膜、核膜完整,胞质、核质分布均匀,随AFB1浓度增加,细胞损伤逐渐明显。NAC组相较于6.25 μg/ml AFB1细胞的生长状态较好。3.细胞凋亡率检测结果显示,6.25 μg/mLAFB1凋亡率平均达到12%,与对照组相比差异极显著性增加(P<0.01),NAC组的凋亡率显著高于对照组,与AFB1组相比极显著降低(P<0.01)。4.肝功能指标检测结果显示,高浓度AFB1组的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)与对照组相比均显著性上升,低浓度AFB1组γ-谷氨酰转肽酶(γ-GGT)和碱性磷酸酶(ALP)水平与对照组相比极显著增加(P<0.01),NAC组与6.25μg/mLAFB1 相比 ALT、AST、ALP 均显著性降低。5.氧化与抗氧化指标结果显示,与对照组相比,AFB1处理组8-羟化脱氧鸟苷(8-OHdG)和丙二醛(MDA)浓度均显著性增加;H2O2在高浓度AFB1(1.25-31.25 μg/mL)表现显著增加;与 6.25 μg/mLAFB1 相比,NAC 组 8-OHdG、MDA 和H2O2均显著性降低。谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性随毒素浓度增加而逐渐降低,NAC组GSH-Px和CAT活性与6.25 μg/mLAFB1相比显著增加。6.qRT-PCR 的检测结果显示,cleaved-caspase-3 和 cleaved-caspase-9 mRNA 的表达量与对照组相比显著性增加,NAC组与6.25 μg/mLAFB1组相比均显著降低。综上所述,AFB1能够抑制幼犬的原代肝细胞活性,引起细胞形态、肝功能指标、细胞氧化与抗氧化功能异常,激活细胞内促凋亡基因Caspase-3和Caspase-9 mRNA的表达,加快了肝细胞凋亡。NAC能够显著提高抗氧化酶活性,降低肝细胞的损伤和凋亡。本试验结果为进一步探索缓解肝脏AFB1毒性的有效临床药物提供了新的研究方向。