【摘 要】
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目的:以天山茶藨茎为研究对象,建立其中多酚类成分的定性、定量方法,筛选不同萃取部位的抗糖尿病、抗氧化活性,分析它们的活性与总多酚、总黄酮含量之间的相关性,并且优化天山茶藨茎黄酮苷元的提取工艺。方法:采用甲醇提取、不同极性溶剂分步萃取,制备天山茶藨茎不同萃取部位(二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位)。建立UPLC-PDA-MS/MS方法,对其中的多酚类成分进行定性分析。色谱条件如下:AC
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目的:以天山茶藨茎为研究对象,建立其中多酚类成分的定性、定量方法,筛选不同萃取部位的抗糖尿病、抗氧化活性,分析它们的活性与总多酚、总黄酮含量之间的相关性,并且优化天山茶藨茎黄酮苷元的提取工艺。方法:采用甲醇提取、不同极性溶剂分步萃取,制备天山茶藨茎不同萃取部位(二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位)。建立UPLC-PDA-MS/MS方法,对其中的多酚类成分进行定性分析。色谱条件如下:ACQUIYY UPLC BEH C18(5cm×5mm,1.7μm),柱温35℃,进样量1.0μL,PDA扫描波长范围200nm~400 nm,以甲醇-水(0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 m L/min,将样品中化合物的保留时间、质谱碎片信息、紫外最大吸收波长与标准品进行比较,推测其中的化学成分。利用分光光度法测定不同萃取部位中总多酚含量(TPC)、总黄酮含量(TFC)。建立UPLC-ESI-MS/MS方法同时定量分析天山茶藨茎14种多酚类化合物,采用Waters ACQUITY BEH Shield RP18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-水(0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 m L/min,柱温为35℃,质谱采用多反应监测(MRM)模式进行定量分析。同时,通过单因素实验(盐酸浓度、提取温度、提取时间)和正交试验优化天山茶藨茎黄酮苷元(山奈酚、槲皮素、异鼠李素、木犀草素、芹菜素)酸水解提取工艺。利用DPPH法、ABTS法测定了不同萃取部位的抗氧化活性,并且测定了α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶、PTP1B抑制活性。结果:在多酚类成分的定性分析中发现天山茶藨茎有14种化合物,分别是表没食子儿茶素、原儿茶酸、表儿茶素、咖啡酸、芦丁、异槲皮素、山奈酚-3-O-芸香糖苷、扁蓄苷、紫云英苷、槲皮苷、槲皮素、木犀草素、山奈酚、芫花素。建立的UPLC-ESI-MS/MS定量方法中,14种成分在测定的质量范围内具有良好的线性关系(r2≥0.9917)、稳定性、重复性、精密度(RSD≤4.84%),加样回收率的范围85.17%~113.14%(RSD≤4.39%),说明方法良好。在不同萃取部位中,乙酸乙酯部位中总多酚含量和总黄酮含量最高(965.51mg GAE/g,162.04 mg CE/g),其中原儿茶酸、咖啡酸、表没食子儿茶素、表儿茶素的含量最高。优化的天山茶藨茎黄酮苷元的提取工艺如下:5%的盐酸甲醇、提取温度70℃、提取时间100min,酸水解提取之后5种黄酮苷元山奈酚、槲皮素、异鼠李素、木犀草素、芹菜素的含量明显上升,其中山奈酚、木犀草素的含量达到1.23±0.02、1.25±0.02 mg/g,槲皮素、异鼠李素的含量达到0.70±0.02、0.66±0.03 mg/g。不同萃取部位的活性研究发现,乙酸乙酯部位的抗氧化和降血糖活性最好,其中DPPH和ABTS自由基清除活性的IC50值分别为0.34、0.18 mg/m L,α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶和PTP1B抑制活性的IC50值分别是134.81 mg/L、457.91 mg/L、0.43 mg/L。结论:本研究建立的UPLC-PDA-MS/MS、UPLC-ESI-MS/MS方法可用于天山茶藨茎多酚类化合物的定性、定量分析。天山茶藨茎不同萃取部位均具有良好的抗氧化和降血糖活性,其中茎的乙酸乙酯部位为主要的活性部位。在天山茶藨茎多酚类成分中,原儿茶酸、咖啡酸、表没食子儿茶素、表儿茶素可能是发挥作用的活性成分。本研究优化的酸水解提取工艺能有效提高天山茶藨茎黄酮苷元的提取效率,可以为深入研究天山茶藨化学成分和生物活性提供参考,为茶藨属植物的开发利用提供理论基础。
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