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猪链球菌病是由多种链球菌引起的猪疫病的总称。猪链球菌(Streptococcus suis，SS)根据表面荚膜多糖(CPS)的抗原性分为35个血清型（1-34型和1/2型），其中猪2型链球菌(Streptococcus suis serotype2，SS2)影响人畜范围最广、最严重。SS的血清型、主要毒力因子[CPS、溶血素(SLY)、溶菌酶释放蛋白(MRP)、胞外因子(EF)]存在地域性差异，且菌株之间的交叉免疫保护性差，有针对性的选择疫苗对一个地区的猪链球菌病防控意义重大。此外，进行SS相关研究的动物模型目前尚没有统一的标准。 本研究首先以2009～2014年源自江淮地区临床病例的43株优势血清型SS2为受试菌株，结合菌株毒力因子（CPS、SLY、MRP、EF）的背景，通过溶血活性（兔血、绵羊血）和两种动物模型（昆明鼠、斑马鱼）试验评估43株SS2的致病力，筛选出SS2强毒株，测定比较LD50。其次根据GenBank数据库中登陆号为DQ443533.1全长溶血素基因（sly）序列，设计合成一对分别带有BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的特异性引物，构建pET-30a-SLY原核表达重组质粒并诱导表达与纯化SLY蛋白，依据对兔血的溶血活性和对Vero细胞的毒性评价SLY蛋白活性，利用Western blotting确定SLY蛋白反应原性。再者用两种动物模型进行SLY蛋白免疫保护性研究，间接ELISA方法检测昆明鼠血清抗体效价水平。最后通过强毒菌株对斑马鱼和昆明鼠的LD50、SLY蛋白的免疫保护性等研究，综合评估适合作为SS2的动物模型。 结果显示:43株SS2对兔血呈现β溶血的菌株39株，γ溶血4株;对绵羊血呈现β溶血的菌株41株，γ溶血2株;筛选出6株SS2强毒株，分别为HF13-8、BZ13-4、HF10-6、HF09-6、XC09-2、BB14-2，对斑马鱼的LD50均明显低于昆明鼠。酶切和测序验证pET-30a-SLY表达重组质粒构建成功，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE可见大小约60kDa的目的蛋白并以包涵体形式出现;SLY蛋白变性、复性后进行镍柱纯化(NI-NTA)，鉴定其具有溶血活性和细胞毒性;Western blotting显示60kDa处有特异性目的条带，SLY蛋白能与SS2阳性血清反应。SLY蛋白对试验动物3次免疫后的相对保护率分别为昆明鼠40％、斑马鱼84％;SS2强毒株灭活全菌体的相对保护率分别为昆明鼠80％、斑马鱼92％;以SS2强毒株全菌体的超声裂解物为包被抗原检测的SS2强毒株灭活全菌体三免的血清IgG抗体效价为1∶819200，SLY蛋白三免的血清IgG抗体效价为1∶6400;以SLY蛋白为包被抗原检测的SS2强毒株灭活全菌体三免的血清IgG抗体效价为1∶51200，SLY蛋白三免的血清IgG抗体效价为1∶102400。 结果表明:筛选的6株优势血清型SS2强毒株(HF13-8、BZ13-4、HF10-6、HF09-6、XC09-2、BB14-2)可以作为制备SS2灭活苗的储备菌株。成功表达的SLY蛋白具有良好的反应原性和免疫原性，可以为深入研制SS2基因工程亚单位疫苗奠定基础。利用实验动物进行SS2致病性、免疫保护性等方面研究，斑马鱼较昆明鼠合适作为动物模型。