小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的抗性风险评估及分子机理

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氯虫苯甲酰胺是一种鱼尼丁受体(RyR)激活剂,对鳞翅目害虫高效,作用于昆虫后可使调控钙离子释放的鱼尼丁受体通道持续的开放,导致细胞中钙离子浓度上升,持续的钙离子的释放会引起虫体不断的收缩、呕吐、脱粪,进而停止进食,最终导致虫体死亡。从“选择抗性”的理论出发,大量、频繁使用杀虫剂后必然导致害虫产生抗药性。随着氯虫苯甲酰胺大量应用于害虫种群的控制中,害虫对它的抗药性问题已经越来越突出。本文以危害十字花科蔬菜的小菜蛾Plutella xylostella L.为研究对象,就氯虫苯甲酰胺对小菜蛾的生物活性、抗性选育、抗性种群相对适合度的变化、抗性风险评估和抗性分子机制进行了研究;并以甲氨基阿维菌素苯甲酸盐为对照药剂逐代选择比对,初步探讨小菜蛾对不同药剂的发展规律及其异同性。旨在为该药剂在生产上合理使用,延长药剂的使用寿命,同时明确其抗性机制,为制定面对该类新颖杀虫剂的综合治理策略提供科学依据。主要研究结果如下:1.采用点滴法测定了氯虫苯甲酰胺对三种种群3龄小菜蛾的毒力,结果表明:氯虫苯甲酰胺对室内相对敏感种群S品系的72h LD50为0.870μg/g,对田间种群BY和ZC的72h LD50为17.604μg/g和1953.925μg/g;用甲氨基阿维菌素苯甲酸盐测定敏感品系的72h LD50为21.862μg/g。2.用氯虫苯甲酰胺对敏感品系小菜蛾3龄幼虫筛选至18代,其LD50为45.67μg/g,抗性倍数为52.51,自F0到F8抗性发展缓慢,F9之后抗性发展加快,至F18已发展成中等水平的抗性;用氯虫苯甲酰胺对BY种群小菜蛾抗性筛选至6代,LD50为26.95μg/g,抗性倍数为30.98;用甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对敏感3龄幼虫筛选14代,LD50为312.20μg/g,抗性倍数为14.28。3.采用组建生命表法比较了小菜蛾敏感品系和抗氯虫苯甲酰胺品系的相对生物适合度,结果表明,抗性品系相对敏感品系的适合度为0.55;与敏感品系相比,抗性品系卵期和蛹期延长,幼虫历期增大,成虫寿命缩短,单雌产卵量下降;抗性品系的羽化率、幼虫存活率和化蛹率降低。4.采用阈性状分析法对抗氯虫苯甲酰胺品系的小菜蛾的现实遗传力进行估算,在整个18代筛选期间,抗性遗传力为0.258。假设小菜蛾的死亡率分别为50%、60%、70%、80%、90%和99%,筛选前后毒力回归线的斜率为2.0,即δp=0.5,预测抗性提高10倍所需的代数分别为:在现实遗传力h2=0.26,群体中50%~90%个体致死时,抗性提高10倍约需4~10代;在现实遗传力h2=0.13时,抗性提高10倍约需9~19代。5.克隆了敏感、BY、F18和ZC小菜蛾鱼尼丁受体(PxRyR)C末端大约4400bp的片段,该片段包含RyR绝大部分的功能域,通过序列比对结果表明:在两个田间种群BY和ZC中发现了已经公布的与小菜蛾抗氯虫苯甲酰胺有关的突变位点,此外在所有抗性种群C末端均发现了较敏感品系缺失的一段14个氨基酸的片段。6.通过实时荧光定量PCR测定了四种品系/种群鱼尼丁受体mRNA的表达量,以敏感品系受体表达量为1,结果表明:BY、F18和ZC种群受体的表达量分别为0.72、0.45和0.49。表明受体表达量的下降可能与抗性之间密切相关。
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