论文部分内容阅读
背景:支气管哮喘是以气道慢性炎症反应为特征的变态反应性疾病,T细胞功能紊乱是哮喘病理过程的始动和维持因素。近年的研究证实,Th1/Th2细胞比例失衡是其发病的核心环节,Th2型细胞优势应答反应是产生支气管哮喘的免疫学基础。现有资料表明多种转录因子参与调控T细胞活化、分化过程,其中转录因子T-bet和GATA-3发挥着重要作用。有人认为T-bet与GATA-3蛋白的相互制衡决定了T细胞在粘膜免疫的命运,也决定了Th1/Th2平衡的稳定性,进而在支气管哮喘的发生发展中起决定性作用。糖皮质激素是目前控制哮喘发作最有效的药物,吸入治疗是推荐长期抗炎治疗哮喘的最常用方法。但糖皮质激素的作用机制和作用靶点尚未完全明了,吸入糖皮质激素对于T细胞特异性转录因子T-bet和GATA-3表达的影响鲜有报道。目的:通过建立小鼠哮喘模型,给致敏小鼠进行糖皮质激素雾化吸入,观察雾化吸入糖皮质激素对哮喘小鼠T淋巴细胞转录因子T-bet蛋白与GATA-3蛋白表达的影响并探讨其可能的机制。方法:24只雄性昆明小鼠随机分为对照组(A组)、哮喘模型组(B组)和雾化吸入糖皮质激素组(C组)。通过卵清蛋白致敏建立哮喘模型。观察3组小鼠的一般情况、支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类、肺组织病理学改变并运用免疫组化技术结合阳性细胞光密度值测定以检测肺组织中T-bet和GATA-3蛋白的表达。结果:1.支气管肺泡灌洗液细胞分类计数显示:哮喘组(B组)与对照组(A组)比较,BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞百分比均明显升高(P＜0.01),差异均有统计学意义。雾化吸入糖皮质激素组(C组)与哮喘组(B组)相比,能明显降低BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞百分比(P＜0.01),差异均有统计学意义。2.肺组织病理学观察显示:小鼠肺组织病理切片HE染色发现,对照组(A组)小鼠肺组织无炎症细胞浸润,哮喘组(B组)小鼠肺组织内可见大量炎症细胞浸润,其炎症细胞浸润程度与对照组(A组)比较明显增加(P＜0.01),差异有统计学意义。雾化吸入糖皮质激素后,雾化吸入糖皮质激素组(C组)小鼠肺组织炎症细胞浸润程度较哮喘组(B组)明显减轻(P＜0.01),差异有统计学意义。3.肺组织切片免疫组织化学染色显示:哮喘组(B组)和雾化吸入糖皮质激素组(C组)的T-bet蛋白表达量均明显低于对照组(A组),P均＜0.01,差异有统计学意义。雾化吸入糖皮质激素组(C组)的T-bet蛋白表达量与哮喘组(B组)比较无明显增加,P＞0.05,差异无统计学意义;哮喘组(B组)和雾化吸入糖皮质激素组(C组)的GATA-3蛋白表达量均明显高于对照组(A组),P均＜0.01,差异有统计学意义,雾化吸入糖皮质激素组(C组)的GATA-3蛋白表达量与哮喘组(B组)比较明显降低,P＜0.01,差异有统计学意义。4.相关性分析显示:哮喘组(B组)小鼠转录因子T-bet蛋白表达量与肺组织炎症细胞浸润程度呈负相关(r=-0.954 P＜0.01),与肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞百分比呈负相关(r=-0.900 P＜0.01)。哮喘组(B组)小鼠转录因子GATA-3蛋白表达量与肺组织炎症细胞浸润程度呈正相关(r=0.954,P＜0.01),与肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞百分比呈正相关(r=0.811,P＜0.05)。哮喘组(B组)小鼠转录因子T-bet蛋白表达量与GATA-3蛋白表达量呈负相关(r=-0.981 P＜0.01)。结论:1.通过OVA致敏成功地建造了小鼠的支气管哮喘模型,在小鼠哮喘模型中,转录因子T-bet和GATA-3蛋白失衡表达,表现为T-bet蛋白低表达和GATA-3蛋白高表达,并且T-bet蛋白表达量与GATA-3蛋白表达量呈负相关。同时T-bet蛋白表达量与肺组织炎症细胞浸润程度呈负相关,GATA-3蛋白表达量与肺组织炎症细胞浸润程度呈正相关,因此T-bet和GATA-3蛋白的失衡表达很可能是哮喘气道炎症形成的重要原因之一。2.雾化吸入糖皮质激素能够降低气道高反应性,减轻气道炎症,可显著抑制转录因子GATA-3的表达,但对T-bet蛋白的表达无明显影响。推测吸入糖皮质激素控制哮喘气道炎症的机制可能并非通过双向调控转录因子T-bet和GATA-3的表达,而是通过减少GATA-3的表达等途径来实现的。