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本研究比较了实验室条件下红三叶和苜蓿青贮过程中各项指标的变化,研究了红三叶中多酚氧化酶的基本特性,测定了不同品种红三叶不同生育期不同器官中多酚氧化酶的活性、总酚含量和褐变性的变化,同时探讨了红三叶青贮过程中蛋白质降解率低的机理以及红三叶有效成份对苜蓿青贮的影响。
收获红三叶和苜蓿萎蔫后在实验室条件下进行青贮,分别于青贮后1,2,3,7,10,15,35d取样进行各种青贮指标的测定。红三叶由于本身发生的褐变反应使其感官评定结果略逊于苜蓿,但在整个青贮过程中红三叶相比于苜蓿有着明显低的pH和显著低的NPN生成量(包括NH<,3>-N、FAA-N和Pep-N),表明红三叶在青贮过程中蛋白质的水解程度要明显低于莒蓿。
对红三叶多酚氧化酶特性的初步研究表明,红三叶多酚氧化酶仅作用于邻苯酚,与对苯酚、间苯酚和一元酚则无作用,而且对不同的邻苯酚其活性也表现很大差异,其中以咖啡酸作底物时活性最高。红三叶多酚氧化酶反应的最适pH值为6.5-7.0,最适温度为25-30℃,50℃时有较好的热稳定性,PVP最适添加量为鲜样重量的10%。红三叶PPO符合酶促反应动力学定律,以咖啡酸为底物时的米氏常数Km值为2.1mmol L<-1>,Vmax值为1000units min<-1>。
五个生长三年红三叶品种和六个生长当年红三叶品种分别于苗期、分枝期、花期和结英期进行取样,并将采回红三叶植株按叶、花(荚)、茎和根不同器官进行分离,分别测定其中的多酚氧化酶活性,总酚含量和褐变性。结果显示,不同品种不同生育期不同器官中多酚氧化酶活性,总酚含量和褐变性均表现不同。花期各器官中多酚氧化酶活性,总酚含量和褐变性基本上均高于其他生育期;不同器官中多酚氧化酶活性和总酚含量以叶片中最高,花(荚)次之,再次为根,以茎中最低,而褐变性大小则依次表现为叶、花(荚)、茎、根;生长二年品种不同生育期多酚氧化酶活性、总酚含量和褐变性的平均值不同程度地高于生长当年品种。红三叶多酚氧化酶活性和褐变性之间早现较高相关性,提示多酚氧化酶活性在红三叶褐变反应中可能起更重要的作用。
红三叶和苜蓿在实验室条件下青贮后,分别于1,2,3,7,10,15,35d取样进行蛋白水解酶活性的测定(包括羧基肽酶、酸性蛋白水解酶、氨基肽酶)。结果显示,红三叶和苜蓿青贮前蛋白水解酶活性相近,青贮后三种蛋白水解酶活性的变化有着明显不同,红三叶在青贮过程中蛋白水解酶活性降低速度显著快于苜蓿。对两种牧草蛋白沉淀能力的比较看出,红三叶可以沉淀一定量的牛血清蛋白(BSA),而苜蓿基本上不能沉淀BSA。
将红三叶和苜蓿分别制成提取液和绿汁发酵液,添加到苜蓿青贮中,以比较它们对苜蓿青贮品质和发酵特性的影响。两种牧草的绿汁发酵液组和红三叶提取液放置48h组相比对照有着显著低的pH值,NPN生成量和显著高的乳酸生成量,有着较好的发酵品质和较低的蛋白水解率。