Gateway技术构建交链孢菌JH505菌株cDNA文库及激活蛋白基因的克隆

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:archxws
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  本实验采用国际上目前最新的Gateway技术构建起交链孢属JH505菌株cDNA文库,以克隆编码激活蛋白的基因。经检测,入门文库的滴度达到1×107,文库总容量为9×107cfu,其阳性克性率为100﹪,插入片段大小大部分在1kb以上,平均插入片段大小大约为1510bp左右。通过LR重组把入门文库转换为表达文库,从而能够用激活蛋白抗血清筛选文库克隆其编码基因。表达文库的滴度为1.58×106,文库总容量为6.32×106cfu,其阳性克性率为100﹪,插入片段大小大部分在1kb以上,平均插入片段大小大约为1680bp左右。用免疫的方法筛选cDNA表达文库,共得4个阳性克隆,通过检测确定为三种片段,测序后,确定基编码区分别为1095bp、993bp、510bp,进GeneBank比对后,发现除510bp与与脉孢菌一种假想蛋白同源性为67﹪,其它同源性都不高。
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