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目的:脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,传统的治疗方法预后差,中位生存期短,特别是高级别浸润性胶质母细胞瘤患者,引起神经系统功能损害较为严重。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类非编码调控单链小分子RNA。他们通过调控跟细胞炎症、生长、应激反应、分化、凋亡等有关的信使RNA来调节细胞生物学过程。近年诸多研究证实:miRNA表达与神经胶质母细胞瘤的发展密不可分,它们参与脑胶质瘤的分子病理机制,是潜在的肿瘤分子标志物及治疗靶点。本课题小组前期研究工作表明miR-148a-3p在脑胶质瘤细胞和组织中高表达,能够促进脑胶质瘤的进展,与病人的生存呈负相关。本课题以人多形性胶质母细胞瘤系为研究对象,旨在研究miR-148a-3p促进脑胶质瘤进展的分子机制,寻找miR-148-3p下游的靶基因,为临床应用miR-148a-3p作为脑胶质瘤分子诊断和治疗的新靶点奠定基础。方法:1使用生物信息学软件初步预测miR-148a-3p的靶基因。2制备过表达和抑制表达miR-148a-3p慢病毒载体,包装成功后转染脑胶质细胞瘤细胞系并通过嘌呤霉素筛选出稳定表达miR-148a-3p的脑胶质细胞瘤细胞系,用qRT-PCR检测其miR-148a-3p的表达效率。3采用荧光定量PCR和Western blot验证过表达及抑制表达miR-148a-3p的脑胶质瘤稳定细胞系中靶基因的表达情况。4利用双荧光素酶报告基因实验验证CUL5与miR-148a-3p靶向关系。5采用荧光定量PCR和Western blot检测脑胶质细胞瘤细胞系及正常胶质细胞中CUL5的表达水平。6在脑胶质瘤细胞株中转染过表达靶基因CUL5的慢病毒以及共转染过表达miR-148a-3p及CUL5的慢病毒,并用嘌呤霉素筛选出稳定细胞系。7使用CCK-8及平板克隆实验检测CUL5对脑胶质瘤增殖能力的影响。8通过划痕及Transwell迁移实验检测CUL5对脑胶质瘤迁移能力的影响。9使用Transwell侵袭实验检测CUL5对脑胶质瘤侵袭能力的影响。10采用CCK-8及平板克隆实验划痕及Transwell实验检测miR-148a-3p的表达水平对CUL5抑制脑胶质瘤增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果1生物信息学软件初步预测CUL5为miR-148a-3p的靶基因之一。2成功构建了过表达及抑制表达miR-148a-3p的U87、U251、BT325、T98G的脑胶质瘤稳定细胞系。3双荧光素酶报告基因实验证明CUL5为miR-148a-3p的直接靶基因。4 CUL5在脑胶质细胞瘤细胞系及正常胶质细胞中均有表达,与正常胶质细胞HA1800相比,CUL5在脑胶质细胞瘤细胞系U87、U251、T98G、BT325中mRNA(差异具有统计学意义(P<0.05))及蛋白水平均下调。5 CCK-8实验及平板克隆实验表明过CUL5能抑制脑胶质细胞瘤细胞系的增殖;划痕及Transwell迁移实验表明过CUL5能抑制脑胶质细胞瘤细胞系的迁移;Transwell侵袭实验表明过表达CUL5能抑制脑胶质细胞瘤细胞系的侵袭。6挽救实验中,过表达miR-148a-3p能够抑制过表达CUL5引起的脑胶质瘤增殖、迁移及侵袭表型的影响。结论:1 CUL5为miR-148a-3p的直接靶基因之一。2成功构建了过表达及抑制表达miR-148a-3p和过表达CUL5及同时过表达miR-148a-3p及CUL5的脑胶质瘤稳定细胞系。3 CUL5能够抑制脑胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭。4 miR-148a-3p能够通过靶向CUL5调控脑胶质瘤增殖、迁移与侵袭。