DAHPS的酶活性测定方法、诱导表达及其性质研究

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本文根据糖脎的物质吸收图谱、线性关系、最小检出限等方面都证明糖脎硫酸显色法是一种比较理想的DAHPS的酶活性测定方法,并确定此法为测定酶活性的第三种方法。对四种材料中油821和GH01,自交亲和型甘蓝和自交不亲和型甘蓝经过受伤和紫外线照射处理后,提取粗酶液,测定酶活性,发现处理过的材料的DAHPS酶活性比未处理的要大,不同的材料的酶活性也不一样,对中油821的粗酶液进行SDS-PAGE电泳,电泳图谱显示受伤处理后DAHPS的表达量明显比未处理的的要大;说明DAHPS受到诱导表达;并且不同的植物对各种不同的处理有不同的抗性。 提取上述材料的根、茎、叶的粗酶液,发现四种材料的根、茎、叶的DAHPS的比活力呈逐渐下降的趋势,说明DAHPS的表达具有器官特异性。 用受伤处理过的中油821为实验材料,提取粗酶液,对DAHPS进行性质研究,设计了六个酶活性测定温度和八个pH酶活性测定温度,测得酶的最适温度为40℃,最适pH为7.0和9.0,因为在植物细胞中存在两种形式的同工酶即DS-Mn和DS-Co。在pH7.0和9.0处,分别加入三种不同的金属离子;结果显示,在pH7.0处,加入锰离子,酶活性较大,在pH9.0处,加入钴离子,酶活性较大。在粗酶液中分别加入不同浓度DTT、巯基乙醇和SNP,分别测定上述各个步骤的DAHPS的酶活性。DTT和巯基乙醇都能使酶活性提高,是酶的激活剂;相反,SNP能抑制酶的活性,是酶活性的抑制剂。
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