【摘 要】
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本研究建立了无机盐培养基及土壤中阿维菌素含量的HPLC检测方法,筛选出了三株能高效降解阿维菌素的细菌,并对这三株细菌的降解特性进行研究。培养基或土壤样品采用乙腈为阿维
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本研究建立了无机盐培养基及土壤中阿维菌素含量的HPLC检测方法,筛选出了三株能高效降解阿维菌素的细菌,并对这三株细菌的降解特性进行研究。培养基或土壤样品采用乙腈为阿维菌素提取剂,以甲醇:水(92:8,V/V)为流动相,在波长250nm,柱温30℃,流速1.OmL/min的条件下进行HPLC分析。所建立方法在1-80mg/L范围内线性关系良好。在1、10、50mg/L三个添加水平,阿维菌素在培养基中的平均回收率在85%以上,日内、日间变异系数低于5%;在土壤中的平均回收率在90%左右,日内变异系数低于3%,日间变异系数低于5%。阿维菌素在培养基中的检测限(LOD)为0.5mg/L,定量限(LOQ)为1mg/L以无机盐培养基作为限制性条件构建细菌筛选模型,经过初步筛选、分离、纯化、驯化、复筛等步骤最终筛选出三株阿维菌素高效降解菌,结合革兰氏染色镜检和分子生物学16SrDNA鉴定,确定细菌分别为枯草芽孢杆菌、粘质沙雷氏菌和蜡样芽孢杆菌,试验中分别命名为G1、G6和G10。研究包括pH值、温度、装样量、底物浓度、细菌接种量、外加碳氮源和金属离子对这三株细菌阿维菌素降解能力及生长量的影响,最终确定了各细菌的最佳降解条件:G1在pH值为6、35℃、装样量80mL、细菌接种浓度0.1%、底物浓度100mg/L、添加0.2%的蔗糖和酵母浸液及0.1%的Fe3+和Cu2+的条件下阿维菌素降解速率最高;G6在pH值为6、40℃、装样量40mL、细菌接种浓度0.05%、底物浓度150mg/L、添加0.2%的蔗糖和牛肉膏及0.1%的Fe3+和Cu2+的条件下阿维菌素降解速率最高;G10在pH值为6、40℃、装样量120mL、细菌接种浓度0.1%、底物浓度150mg/L、添加0.2%的淀粉和酵母浸液及0.1%的Fe3+和Cu2+的条件下阿维菌素降解速率最高。将三株细菌在试验室进行土壤模拟降解试验,试验分灭菌土壤组和非灭菌土壤组,并选择10mg/kg、25mg/kg和50mg/kg三个浓度进行试验,在25℃、光照强度6500勒克斯、光暗比12h:12h的条件下连续培养60d,最终确定了阿维菌素在未灭菌土壤中的最佳降解时间为40-60d,而灭菌土壤中阿维菌素降解较少。
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