本课题以软枣猕猴桃(Actinidia arguta(Sieb.&Zucc)Planch.ex Miq.)四倍体植株为试验材料,开展了以下研究:一、离体培养软枣猕猴桃花药,研究了软枣猕猴桃花药培养过程中的影响因子,筛选适宜的培养条件,并获得配子体发育来的单倍体植株;二、以软枣猕猴桃叶片、茎段和叶柄为外植体,研究软枣猕猴桃愈伤组织诱导及植株再生的影响因素,建立软枣猕猴桃品种‘魁绿’和‘佳绿’的再生体系。主要研究结果如下:1.采集软枣猕猴桃‘魁绿’和‘绿王’小孢子处于四分体时期到成熟期的花蕾,研究了小孢子发育时期和花蕾形态特征的关系。结果表明:软枣猕猴桃小孢子从四分体时期到成熟期所经历的时间较短;两者相同发育时期的花蕾外部形态相似,但‘魁绿’的花蕾直径大于‘绿王’花蕾直径。小孢子的发育时期与花蕾的外部形态有一定的相关性,花蕾直径及外部形态特征可作为判断小孢子发育时期的依据。2.采用单因素试验设计,分别研究了小孢子的发育时期、4℃低温预处理时间、基本培养基、植物生长调节剂及品种(品系)类型对软枣猕猴桃花药培养愈伤组织诱导的影响,结果表明:小孢子处于单核靠边期的花药愈伤组织诱导率最高,低温预处理5d的花药愈伤组织诱导率高于处理1d、3d、7d的花药。基本培养基与所添加植物生长调节剂的种类及浓度对花药愈伤组织的诱导起着关键作用。‘绿王’花药在培养基MS+2,4-D 1mg/L+6-BA 5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.5g/L上愈伤组织诱导率最高,为93.30%;‘魁绿’的最适愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 2mg/L+6-BA5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.5g/L,诱导率为90.91%。3.以MS为基本培养基,添加不同种类及浓度的植物生长调节剂诱导软枣猕猴桃花药愈伤不定芽分化的研究表明:植物生长调节剂的种类及浓度对诱导不定芽再生具有重要作用。ZT对‘魁绿’不定芽再生具有较好的诱导效果,但不能诱导‘绿王’不定芽再生;而在添加6-BA或TDZ的培养基上两个品种的愈伤组织均未分化出不定芽。‘魁绿’花药愈伤组织在MS+IBA 0.01mg/L+ZT 3 mg/L+蔗糖30g/L的培养基上不定芽再生率最高,再生率为64.55%。再生苗在培养基1/2MS+IBA 0.01 mg/L上生根,获得完整植株。4.利用流式细胞仪对所获得的119株再生植株进行倍性鉴定,结果显示:软枣猕猴桃花药培养获得的再生植株倍性复杂,其中3.36%为二倍单倍体;56.3%为四倍体;4.20%为六倍体;36.13%为八倍体。不同倍性植株形态不同,随着植株倍性的增加,再生植株的器官(根、茎、叶片)体积增大。5.以软枣猕猴桃品种‘魁绿’、‘佳绿’的无芽茎段、叶片、叶柄为外植体,研究了植物生长调节剂组合及外植体类型对软枣猕猴桃愈伤组织诱导及植株再生的影响,从而建立了‘魁绿’和‘佳绿’的再生体系。结果表明:6-BA对软枣猕猴桃愈伤组织的诱导效果好于KT,‘魁绿’和‘佳绿’叶片分别在MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L和MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1 mg/L的培养基上愈伤组织诱导效果最佳,诱导率分别为93.3%和96.2%。在不定芽再生培养过程中,6-BA和TDZ不能诱导愈伤组织分化出不定芽,而ZT对不定芽分化的诱导效果较好;‘魁绿’和‘佳绿’均在培养基MS+NAA 0.05 mg/L+ZT 3 mg/L上不定芽分化率最高,分别为72.0%、37.8%。品种类型及外植体类型对愈伤组织诱导率和不定芽再生率均有显著影响,‘魁绿’的不定芽分化率明显高于‘佳绿’;无芽茎段和叶片的愈伤组织诱导率均高于90%;叶片的不定芽分化率最高,显著高于茎段和叶柄。再生苗在培养基1/2MS+IBA 0.01 mg/L上的生根率为97%。