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卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤，确诊时约70％已属晚期。虽然晚期卵巢癌经过初次治疗后70％～80％的患者能获得临床缓解，但60％～75％的患者终将复发。卵巢癌化疗耐药是卵巢癌复发和治疗失败的最主要原因之一。因此，卵巢癌化疗耐药不仅是当前研究的热点，也将是今后卵巢癌研究中的长期任务。
神经元限制性沉默因子(neuron-restrictive silencer factor，NRSF; RE-1 silencingtranscription factor，REST)是一种去组蛋白乙酰化修饰蛋白，对神经性基因转录调控有抑制作用。REST在不同的恶性肿瘤中可表现出致癌和抑癌的不同作用，在成神经管细胞瘤中为致癌因子，在结肠癌、小细胞肺癌中REST作为肿瘤抑制因子发挥作用。
REST蛋白负调控功能的发挥依赖于其自身与某些基因的神经元限制性沉默元件(neuron-restrictive silencer element，NRSE/Repressor Element，RE-1)相结合，发生组蛋白去乙酰化，使启动子区域无法和转录因子及RNA聚合酶结合从而发挥阻遏作用。现在已发现的含有RE-1序列、受REST作用的基因有100多种，其中包括β微管蛋白Ⅲ(betaⅢ tubulin，TUBB3)。
微管蛋白是细胞内紫杉醇作用的主要位点，与卵巢癌紫杉醇获得性耐药密切相关。目前已经确定的微管蛋白有7种，在真核生物细胞中普遍存在，并且高度保守。Β微管蛋白同型和微管蛋白突变在耐药中发挥巨大的作用。Β微管蛋白分为7种β同型，到目前为止，发现TUBB3高表达可能和多种恶性肿瘤的紫杉醇耐药及预后不良密切相关，如卵巢癌、小细胞肺癌等，但对其产生的机制一直不十分清楚。REST作为沉默因子，很可能是引起紫杉醇耐药现象的始动因素之一。
目前国内外关于REST与恶性肿瘤耐药的相关报道极少，且尚未见其与卵巢癌耐药的相关报道。本试验拟通过研究REST在卵巢癌中对TUBB3表达的影响及紫杉醇耐药的影响，探究卵巢癌耐药的机制，为卵巢癌耐药临床治疗提供理论基础。
方法：
第一部分:Western blot方法检测REST及TUBB3在耐药及非耐药卵巢细胞中的表达情况;MTT法检测不同浓度紫杉醇作用下耐药细胞及非耐药细胞的细胞周期;流式细胞仪检测不同细胞在药物作用下的凋亡情况;Western blot方法检测REST及TUBB3在不同药物浓度下的表达情况;应用SiRNA干扰REST表达后，应用Western blot方法检测TUBB3表达情况;应用PBA抑制组蛋白去乙酰化后，Western blot方法检测TUBB3表达情况。
第二部分:选取2006年至2008年间在中国医科大学附属盛京医院妇产科收治的卵巢癌患者68例。所有患者均接受标准卵巢癌手术治疗及紫杉醇类加铂类联合化疗6～8疗程。根据2010年NCCN卵巢癌诊治指南分为耐药组（27例）及非耐药组（41例）。采取免疫组织化学方法检测其手术切除的卵巢癌石蜡标本组织中REST及TUBB3表达情况，并分析其与卵巢癌耐药及临床病理特征之间的关系。
结果：
第一部分:REST在卵巢癌非耐药细胞SKOV3中有表达，而在耐药细胞SKOV3/tax中呈弱表达或不表达。TUBB3在耐药细胞SKOV3/tax中表达明显高于非耐药细胞SKOV3，P＜0.01。紫杉醇对非耐药细胞增殖的抑制作用强于耐药细胞;且随药物浓度增加，紫杉醇引起非耐药细胞凋亡明显增加;而不同浓度紫杉醇对耐药细胞引起的凋亡无明显变化;紫杉醇将非耐药细胞阻滞于G2/M期。随着紫杉醇药物浓度增加，非耐药细胞SKOV3中REST表达下降，P＜0.01，TUBB3表达增高，P＜0.01。SiRNA干扰SKOV3细胞中REST表达后，TUBB3表达增加。PBA抑制组蛋白去乙酰化作用后，SKOV3、OVCAR3细胞中TUBB3表达增加。
第二部分: REST在非耐药组卵巢癌组织中表达(70.7％)明显高于耐药组（37.5％），＜0.05; TUBB3在非耐药组卵巢P癌组织中表达(47.6％)明显低于耐药组卵巢癌组织(77.8％)，P＜0.05; TUBB3及REST在同一组织的表达相反，REST在TUBB3表达阴性卵巢癌组织中的表达明显高于TUBB3表达阳性卵巢癌组织，P＜0.05; REST、 TUBB3在Ⅰ～Ⅱ期卵巢癌患者组织中的表达率与Ⅲ～Ⅳ期无明显差异，P＞0.05; REST、TUBB3在高、中、低分化及各病理类型卵巢癌组织中的表达率也无显著差异，P均＞0.05。
结论：
1、REST表达降低与卵巢癌紫杉醇类耐药相关。
2、TUBB3表达增高与卵巢癌紫杉醇类耐药相关。
3、在一定药物浓度范围内，REST随药物浓度增高而表达下降，TUBB3随药物浓度增高而表达升高，可能表示REST表达下降与卵巢癌获得性紫杉醇类耐药相关。
4、REST抑制TUBB3表达，REST可能通过去乙酰化作用抑制TUBB3的表达。