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首先在GenBank中查出高致病性禽流感病毒（AIV）、新城疫病毒（NDV）、古典猪瘟病毒（CSFV）和口蹄疫病毒（FMDV）基因组的已知序列,对各病毒基因区域进行同源性分析,结合各病毒基因组的结构特点,比较并确定AIV的M基因区、NDV的F基因区、CSFV的5′端非编码区和FMDV的2B基因区为各病毒的保守序列.利用DNAsis软件对上述各病毒的保守序列进行引物设计,要求G+C含量50﹪-60﹪,长度18-25bp,Tm值72-85之间.对设计的4种病毒引物再用引物二聚体分析软件Vector NTI Suite 5.5进行引物之间二级结构的分析,避免引物之间形成稳定的二聚体结构,最终确定了4种病毒各自的引物.用建立的多联PCR方法对61份临床病料、人工接种乳鼠病料和人工接种鸡胚尿囊液等进行了检测,检出AIV 12份,NDV 10份,CSFV 15份,FDMV 8份,与部分病料电镜以及免疫学方法检测结果相一致,验证了该项研究所建立的多联PCR方法的可行性,为快速诊断上述4种病毒引起的动物疫病提供了一种敏感、特异、省时、省力、降低成本的分子生物学检测技术.