论文部分内容阅读
第一部分:Ang1-7对肥厚心肌CX43的干预研究目的观察比较WKY和SHR安慰剂组、实验组之间血压、心肌肥厚和纤维化程度及左心室肌组织Total-CX43/PS368-CX43(CX43/PS368)的表达差异,以及Ang1-7干预后的变化,探讨Ang1-7对肥厚心肌组织的影响价值。方法选定16周龄WKY为正常血压组,16周龄SHR为高血压组,又把SHR随机分为2组:(1)WKY对照组5只,(2)SHR+NS安慰剂组5只,(3)SHR+Ang1-7实验组5只。干预前经尾套法测3组大鼠尾动脉收缩压并做好记录。动物干预:WKY组不做任何干预,安慰剂组皮下埋植微型渗透压泵泵入生理盐水,实验组皮下埋植微型渗透压泵泵入Ang1-7进行干预,连续28天后重复测尾动脉收缩压。后在异氟烷吸入麻醉下开胸取心,留左心室中间组织为实验染色部分(本文如没有特殊说明,心肌组织和心肌细胞均指左心室心肌),多聚甲醛固定6-8小时,石蜡包埋切片,分别用HE和Masson染色观察心肌肥厚和纤维化程度变化,免疫组化染色观察CX43/PS368分布差异。取左心底小部分存-80℃冰箱,Western Blot检测CX43/PS368表达差异。综合以上结果分析Ang1-7对SHR心肌肥厚和纤维化程度及CX43/PS368表达的影响。结果3组大鼠尾动脉收缩压结果显示:与WKY组相比,干预前SHR+NS组和SHR+A组血压均显著升高(p<0.01),SHR+NS组和SHR+A组血压比较无统计学差异(p>0.05)。干预后与WKY相比,SHR+NS组和SHR+A组血压均显著升高(p<0.01),但与SHR+NS组相比,SHR+A组血压显著下降(p<0.01)。HE染色结果示WKY组心肌细胞排列整齐,组织结构清晰,SHR+NS组心肌细胞排列紊乱,组织结构不清,SHR+A组介于二者之间。Masson染色显示WKY蓝染不明显,SHR+NS组蓝染明显,SHR+A组蓝染程度介于二者之间。与WKY相比,Western Blot检测CX43/PS368表达在SHR+NS组显著减少(p<0.05),SHR+A较SHR+NS组明显增加(p<0.05),但仍显著少于WKY组(p<0.05)。免疫组化结果显示与WKY相比,SHR+NS组CX43/PS368在心肌组织表达显著减少(p<0.05),SHR+A较SHR+NS组显著增加(p<0.05),但仍明显低于WKY组(p<0.05)。结论WKY和SHR之间存在显著的血压、心肌肥厚和纤维化程度的差异,以及CX43/PS368表达和分布的差异,而经Ang1-7干预后这种差异显著缩小。为下一步观察Ang1-7对SHR心室肌钠电流的研究奠定结构和电生理基础。第二部分:大鼠心肌细胞分离及钠电流记录目的观察比较改良Langendorff主动脉逆行灌流联合酶消化2步法急性分离SD、WKY、SHR所得心肌细胞数量和质量差异。比较肥厚心肌与正常心肌钠电流差异,并研究经Ang1-7干预后的肥厚心肌钠电流变化,从而探讨Ang1-7在肥厚心肌电生理中的应用价值。方法大鼠分组和干预同第一部分。前期实验比较了改良Langendorff主动脉逆行灌流联合酶消化2步法急性分离SD、WKY、SHR所得心肌细胞数量和质量差异。干预完成后在异氟烷吸入麻醉下,用改良Langendorff主动脉逆行灌流联合酶消化2步法分离WKY、SHR安慰剂组和实验组的心肌细胞。运用膜片钳技术在全细胞模式下记录单个心肌细胞膜电容、峰值钠电流、钠电流激活及I-V曲线变化。结果3组大鼠均获得80%-90%的横纹清晰、透亮的长杆状细胞,可供膜片钳试验顺利进行。心室肌细胞钠电流峰值SHR+NS组显著高于WKY组(p<0.05),而SHR+A组钠电流峰值较SHR+NS组显著减小(p<0.05)。与WKY组相比,SHR+NS组膜电容值和SHR+A组均显著增加(p<0.05)。与SHR+NS组相比,SHR+A组膜电容值显著降低(p<0.05)。但3组之间的电流密度值两两比较均没有统计学差异(p>0.05)。结论改良Langendorff主动脉逆行灌流联合酶消化2步法分离所得3组大鼠的心肌杆状细胞存活比率没有差异;皮下微渗泵入Ang1-7可影响SHR心肌细胞钠激活电流峰值和膜电容大小。