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背景和目的:肝细胞癌是我国最常见的恶性肿瘤,恶性程度高,病情发展快。占我国恶性肿瘤发病的第三位,肿瘤死亡的第二位。为了改善肝细胞癌的预后和治疗,人们一直在致力于研究导致肝细胞癌发生发展的细胞及分子生物学机制,希望能发现新的治疗靶点。DNASE1L3是一种脱氧核糖核酸内切酶,TCGA数据库显示DNASE1L3肝细胞癌组织中表达量明显下调,与肝细胞癌病人的预后相关,提示DNASE1L3可能在肝细胞癌的发生发展中起着一定作用。本研究旨在探索DNASE1L3在肝细胞癌的发生发展中的作用,从而为肝细胞癌的治疗提供更多的理论依据。方法:本实验主要包括四个部分。1.第一部分通过免疫组织化学技术检测DNASE1L3在肝癌患者癌组织和癌旁组织的蛋白表达水平。2.第二部分关于DNASE1L3对肝癌细胞功能学的影响。（1）通过qRT-PCR和WesternBlot技术检测DNASE1L3蛋白在正常人肝细胞7701和人肝癌细胞LM3、SKHEP1、HEPG2、97H、HUH7的表达情况。（2）运用质粒在LM3细胞中过表达DNASE1L3、慢病毒在SK-HEP1细胞中过表达DNASE1L3以及在HUH7细胞中沉默DNASE1L3。然后通过96孔板倍比稀释法挑选单克隆稳转株,通过qRT-PCR和Western-Blot筛选出高转染效率的单克隆稳转株。（3）检测DNASE1L3对LM3、SK-HEP1、HUH7细胞的生物学行为的影响:运用CCK8增殖实验检测细胞增殖;运用细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;运用细胞粘附试验检测细胞外基质对细胞的粘附能力;运用流式细胞实验（Annexin V-FITC/PI）来检测细胞的凋亡。3.第三部分关于DNASE1L3抑制肝细胞癌迁移和侵袭的分子机制研究。（1）运用Western-Blot技术检测LM3和SK-HEP1细胞过表达及HUH7细胞沉默DNASE1L3,检测EMT相关基因（Vimentin、E-cadherin、N-cadherin、ZO-1）,研究DNASE1L3对EMT相关基因的调控作用。（2）运用Western-Blot技术检测DANSE1L3对E-cadherin上游指标:Snail、Smad3、TGFβ、β-catenin蛋白表达的影响情况。4.第四部分关于DNASE1L3的肝癌细胞外功能。（1）通过将外源DNA加入培养基与过表达DNASE1L3的SK-HEP1细胞共同培养,运用Transwell实验检测DNASE1L3对DNA促进肝癌细胞迁移和侵袭的影响。（2）运用细胞粘附实验检测DNASE1L3对DNA促进细胞外基质对肝癌细胞粘附的影响。结果:1.第一部分:免疫组化的结果显示DNASE1L3的表达与肝癌患者的预后呈正相关（P<0.0001）。2.第二部分:（1）qRT-PCR和Western-Blot的结果显示DANSE1L3在人正常肝细胞7701和人肝癌细胞LM3、SK-HEP1、HEPG2、97H、HUH7中均有表达,DNASE1L3在HUH7细胞中表达最高,在SK-HEP1和HEPG2细胞中表达次之,在LM3、97H、7701细胞中表达均最低。（2）通过qRT-PCR及Western-Blot在过表达或沉默DNASE1L3的LM3、SK-HEP1、HUH7细胞中筛选出转染效率最高的单克隆稳转株。（3）（1）在过表达DNASE1L3的LM3和SK-HEP1细胞中筛选的单克隆稳转株进行各项细胞功能学结果显示如下:CCK-8结果显示DNASE1L3过表达不影响LM3细胞增殖（P>0.05）;细胞划痕的实验结果显示:过表达DNASE1L3抑制了LM3和SK-HEP1细胞的迁移;Transwell实验结果表明过表达DNASE1L3抑制了LM3和SK-HEP1细胞的迁移和侵袭（p<0.01）;细胞粘附实验结果显示过表达DNASE1L3减少了细胞外基质对LM3和SK-HEP1细胞的粘附;流式细胞实验的结果表明过表达DNASE1L3不影响LM3和SK-HEP1细胞的早期凋亡和晚期凋亡（P>0.05）。（2）在沉默DNASE1L3的HUH7细胞中筛选的单克隆稳转株进行各项细胞功能学结果显示如下:CCK-8结果显示DNASE1L3沉默不影响HUH7细胞增殖（P>0.05）;细胞划痕的实验结果显示:沉默DNASE1L3促进了HUH7细胞的迁移;Transwell结果显示沉默DNASE1L3促进了HUH7的迁移和侵袭（p<0.01）;细胞粘附实验结果表明沉默DNASE1L3增加了细胞外基质对HUH7的粘附;流式细胞实验结果显示沉默DNASE1L3不影响HUH7细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率（P>0.05）。3.第三部分:（1）在肝癌细胞中,过表达DNASE1L3抑制了Vimentin、N-cadherin、Twist,促进了E-cadherin和ZO-1等相关EMT指标的表达;沉默DNASE1L3促进了Vimentin、Twist,抑制了E-cadherin和ZO-1等相关EMT指标的表达。（2）过表达DNASE1L3抑制了E-cadherin上游指标:Snail、Smad3、TGFβ、β-catenin蛋白的表达;沉默DNASE1L3促进了E-cadherin上游指标:Snail、Smad3、TGFβ、β-catenin蛋白的表达;4.第四部分:（1）在过表达DNASE1L3的SK-HEP1中,加入外源DNA后,DNASE1L3会抑制DNA诱导的肝癌细胞转移。（2）在过表达DNASE1L3的SK-HEP1中,加入外源DNA后,DNASE1L3会抑制DNA诱导的细胞外基质对肝癌细胞的粘附。结论:DNASE1L3可以抑制肝癌细胞的转移,但不影响肝癌细胞的增值和凋亡。DNASE1L3有望变成抑制肝细胞癌转移的新靶点。