仔猪腹泻病是生产过程中常见的疾病,引起仔猪腹泻病的因素很多,其中细菌性腹泻是影响仔猪健康生长的重要病因之一。本研究采集兰州市辖区4家大型规模化养猪场发生腹泻的仔猪粪便病料,进行病原菌分离鉴定和药敏试验,并对细菌学鉴定的病原菌进行分子生物学鉴定,旨在确定目前引起兰州市规模化养猪场仔猪腹泻病的主要致病菌种类,并且通过药敏试验选合理选择抗生素,旨在为临床防治仔猪腹泻病提供参考。从2015年5月至2016年8月间,先后选择4家规模化养猪场采集具有腹泻症状的仔猪粪样120份,先涂片、染色、镜检,然后分别选择普通营养琼脂、麦康凯培养基、SS培养基、伊红美蓝琼脂培养基、沙门氏菌显色培养基、亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂培养基、改良CCDA琼脂、脑心浸液血琼脂培养基、血琼脂平板等特殊培养基进行病原菌分离、纯化;对分离菌株进行生化鉴定,再选择20种抗生素药敏纸片进行药敏试验;提取分离基因组进行16S rRNA基因扩增测序,并在GenBank中进行blast比对,分析细菌的同源性。结果显示:本次研究从采集的病料中分离出112株大肠杆菌;108株产气荚膜梭菌;53株克雷伯氏菌;96株空肠弯曲菌;13株坏死杆菌;大肠杆菌和克雷伯菌对头孢唑林、头孢噻肟、头孢噻吩、氨曲南等药物的耐药率比较高,对亚胺培南、头孢哌酮、美洛培南、哌拉西林等药物敏感,产气荚膜梭菌和坏死杆菌对氨苄西林的耐药率比较高,对大多数抗生素比较敏感,空肠弯曲菌对本次研究的所有抗生素都比较敏感;经细菌学诊断的分离菌株提取DNA进行PCR扩增,获得的目的基因片段测序结果在GenBank中进行blast比对后与已知大肠杆菌、产气荚膜梭菌、克雷伯氏菌、空肠弯曲菌和坏死杆菌序列具有较高的同源性。结论:采集仔猪腹泻病病料病原菌分离鉴定需要选择合理的培养基,染色镜检结合生化试验可综合判断致病菌的种类;PCR检测可提高病原菌诊断的准确率,灵敏度高、特异性强,通过基因测序可准确的知道细菌的种类,缩短确诊的时间;药敏试验可检测细菌的耐药程度,为临床用药提供依据。