论文部分内容阅读
背景:多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种中枢神经系统(central nerve system,CNS)的慢性自身免疫性疾病,以炎症复发和病情缓解交替发生为特征,好发于15~50岁的青壮年之中。目前临床中对MS患者大都采用综合性治疗的方式,但是即便治疗及时,这些疗法也只能起到缓解而非治愈MS的效果。因此,增强MS的治疗康复,已经成为临床及基础研究中的热点与重点。锂剂是临床治疗预防双相情感障碍躁狂的一线药物,具备对中枢神经系统的保护功能,同时能够对多种免疫细胞产生调节作用。目前的研究表明,使用锂剂能够在实验动物中对MS替代模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)产生显著的治疗作用,并且该治疗作用和IFN-γ干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)存在一定的联系。IFN-γ由Th1型细胞和单核细胞合成分泌,可以调节细胞因子之间的“级联作用模式”,增强免疫应答,在MS病人血清中表达升高。除了关注锂剂对于免疫系统的作用以外,我们还推测,锂剂治疗MS的过程,是一个抑制GSK3β、进而激活神经细胞内促细胞生存Wnt/β-catenin通路的过程。综上,探究锂剂对MS具体的治疗效果及相关机制,有助于提升MS病人的预后,同时发掘更多的治疗靶点。在本项研究中,我们重点关注锂剂在IFN-γ功能缺失时对CNS炎症的影响,同时还探究了β-catenin在锂剂治疗MS中扮演的具体角色。目的:探究锂剂在治疗MS过程中与IFN-γ和β-catenin的相互作用。方法:1.IFN-γR缺失小鼠PCR鉴定;2.使用MOG35-55和百日咳毒素联合注射的方法,诱导IFN-γR缺失小鼠发生EAE;3.对不同组中EAE小鼠脑部炎症非典型症状比例进行统计;4.对不同组中EAE小鼠脊髓炎症典型症状进行打分统计;5.收集小鼠脑和脊髓组织,进行H&E染色分析;6.氯化锂和IFN-γ处理小鼠脑内皮细胞b END.3;7.免疫印迹检测b END.3细胞中β-catenin表达量的变化;结果:1.经PCR验证,实验用小鼠为IFN-γR-/-基因型,为IFN-γR缺失;2.MOG35-55和百日咳毒素联合注射的方法,成功在IFN-γR缺失小鼠中诱导了脑和脊髓炎症的发生;3.锂剂治疗降低了脑部炎症非典型症状的比例以及脊髓炎症典型症状的平均得分;4.锂剂治疗缓解了脑和脊髓组织中的炎症反应;5.锂剂对于CNS中炎症的治疗作用,可以不依赖于IFN-γ的功能;6.锂剂对于IFN-γR缺失小鼠脑和脊髓炎症的缓解作用,不具有长效性;7.锂剂和IFN-γ处理,显著提高了脑内皮细胞中β-catenin的表达水平;结论:锂剂可以激活脑内皮细胞中β-catenin信号,抑制脑和脊髓炎症的发生;锂剂对于CNS炎症的治疗,可以不依赖于IFN-γ的功能,但相应治疗作用不具有长效性。