【摘 要】
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油菜素内酯(Brassinosteroids,BRs)对植物的生长发育起着重要的调控作用。番茄富含番茄红素等多种营养成分,是世界上栽培最为广泛的蔬菜之一,也是研究果实生长发育的模式植物。作为BR的受体,番茄Sl BRI1(Brassinosteroid Insensitive1)感知BRs后通过激酶区的磷酸化向下游传递信号,因此探究Sl BRI1磷酸化位点及其功能,对于精准调控BR信号,加深BR信
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油菜素内酯(Brassinosteroids,BRs)对植物的生长发育起着重要的调控作用。番茄富含番茄红素等多种营养成分,是世界上栽培最为广泛的蔬菜之一,也是研究果实生长发育的模式植物。作为BR的受体,番茄Sl BRI1(Brassinosteroid Insensitive1)感知BRs后通过激酶区的磷酸化向下游传递信号,因此探究Sl BRI1磷酸化位点及其功能,对于精准调控BR信号,加深BR信号路径在番茄分子育种中的应用有着重要的意义。本论文研究了油菜素内酯受体Sl BRI1的磷酸化位点Thr-825的生物学功能和对农艺性状的影响。通过构建原核表达载体在大肠杆菌体外表达,探究了Thr-825对Sl BRI1磷酸化水平的影响。通过构建植物过表达载体和番茄遗传转化,获得Thr-825位点模拟非磷酸化突变的番茄转基因系cu3-abs1::Sl BRI1-T825A-GFP(T825A-GFP)。以Sl BRI1过表达转基因系cu3-abs1::Sl BRI1-GFP(Sl BRI1-GFP)为对照,对番茄Thr-825位点突变系的株型,花器官形态,叶器官形态,果实产量和品质等生物学性状和农艺性状进行观测比较,研究Sl BRI1磷酸化位点Thr-825的生物学功能及其对农艺性状的影响,取得研究结果如下:1.构建了过表达载体PSl BRI1::SlBRI1-T825A-GFP-p BI121,通过转化番茄BRI1弱突变体cu3-abs1,得到番茄转基因系T825A-GFP。2.构建了Thr-825模拟非磷酸化和磷酸化的原核表达载体p Flag-MAC-Sl BRI1-CD-T825A和p Flag-MAC-Sl BRI1-CD-T825D,通过体外磷酸化水平检测,发现Sl BRI1-CD-T825A比Sl BRI1-CD磷酸化水平更高,说明Thr-825磷酸化对BRI1的磷酸化水平起负调节作用。3.实时定量PCR试验中,T825A-GFP和Sl BRI1-GFP的Sl BRI1转录水平相当且都大于cu3-abs1,而Sl CPD,Sl DWARF转录水平也相当且都小于cu3-abs1,表明两转基因株系都适当恢复了cu3-abs1的BR信号通路。4.下胚轴敏感性试验发现,相比于Sl BRI1-GFP,T825A-GFP株系对24-epi BL的敏感性更强,对BRZ的敏感性更弱,说明T825A-GFP的BR信号通路有所增强;5.对番茄转基因株系的农艺性状进行测量比较,发现T825A-GFP株系相比于Sl BRI1-GFP株系,植株增高,茎秆增粗,植株展幅增大,花器官和叶面积也增加,果实体积和单果重增加,从而产量更高。
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