草鱼鱼鳞胶原蛋白提取纯化工艺研究

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胶原蛋白(collagen)营养很丰富,含有18种氨基酸,其中含人体必需氨基酸7种。胶原蛋白不仅有很高的营养价值,还有很高的应用价值,可应用在生物医学、食品加工中,还可做保健品等。鱼鳞中含有大量的胶原蛋白,每年我国废弃的鱼鳞产量达30万吨以上。如何提高鱼鳞的综合利用对保护环境、节约资源有着重要的意义。本课题研究采用超高压辅助热水从鱼鳞中提取胶原蛋白,采用超滤工艺分离纯化所提取的胶原蛋白,将纯化后的胶原蛋白通过SDS-PAGE电泳分析鉴定。本课题主要研究内容及研究结论如下:⑴超高压辅助热水提取胶原蛋白的工艺确定:对鱼鳞先进行超高压处理再采用热水提取胶原蛋白,通过考察超高压保压时间、超高压压力两因素,进行5×5两因素的交叉试验,所得数据运用Excel、SAS等软件进行方差分析和邓肯式新复极差法多重比较分析,得出最佳超高压条件参数为超高压保压时间15min、超高压压力250MPa;将经超高压处理后的鱼鳞采用热水提取胶原蛋白,考察热水提取温度、热水提取时间,pH值和料液比四个因素对提取率的影响,先进行单因素试验,再依据单因素的基础上进行正交试验优化,从而确定出最佳热水提取工艺参数为热水提取温度90℃、提取时间2.5h、pH值为7.0、料液比为1:100,在此最佳条件下的提取率为87.9%。通过对超高压辅助热水提取胶原蛋白与传统水提工艺比较得出,超高压辅助热水提取胶原蛋白能够极大提高胶原蛋白的提取率,并且提取过程简单省时。⑵SDS-PAGE电泳分析:在超高压辅助热水提取最佳工艺的条件下得到的粗胶原蛋白水提液进行电泳分析,观察其考染所得的凝胶图谱发现,粗胶原蛋白水提液呈现明显的特征条带链,但其泳道上有较多杂带,需进一步分离纯化。⑶超滤分离纯化粗胶原蛋白水提液工艺确定:采用孔径大小为100kDa的超滤膜分离纯化粗胶原蛋白水提液,依据单因素的研究基础之上,对超滤工艺条件参数采用二次正交旋转组合试验设计,建立截留率(Y)与操作压力(A)、操作温度(B)和pH(C)的数学回归模型,得到回归方程为:Y95.61-6.86A1.43B0.72C0.59AB4.12A~24.11B~20.69C~2分析研究超滤工艺参数对截留率的影响,优化出超滤纯化的最佳工艺参数为:操作压力0.14MPa、操作温度40℃、pH=9.50。⑷SDS-PAGE电泳分析:将纯化后的胶原蛋白浓缩液采用SDS-PAGE电泳分析,从电泳图谱可鉴定出所提蛋白质为胶原蛋白,并且条带清晰、纯度良好无杂带。
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